免疫沉淀后 WB 常被兔 IgG 的 25 kDa 轻链条带抢占屏幕，目标蛋白一旦重叠就定量失准。A25022 是只认兔 IgG 轻链的 HRP 二抗，重链、Fc 完全放行。把它的核心参数拆成 7 组，直接告诉你线性下限、补偿窗口和批次差控制方式，拿来就能写进论文方法段。

1. 抗原靶区：兔 κ 轻链恒定区 114-214 aa，亲和力 Kd 0.6 nM

免疫原选用重组兔 κ 链恒定区，带 6×His 标签纯化后免疫驴。杂交瘤上清过 Protein L 柱，筛得 κ 专一克隆。BLI 测得 Kd 0.6 nM，与 λ 链交叉 <3%。IP 洗脱液里 IgG 总量 10 ng，仍能优先抓到轻链，不漏检。

2. HRP 密度：2.8 mol/mol，比活性 27000 s?1

高碘酸盐氧化法标记，酶/抗体摩尔比 2.8，避免 >3 带来的聚集。催化常数 kcat 27000 s?1，比市售平均 20000 s?1 高 35%。ECL 显影 0.5 s 即可让 0.05 ng 轻链条带显色，曝光 2 s 不饱和，定量窗口 0.05–5 ng。

3. 线性范围：0.05–5 ng，R2 0.999

兔 IgG 轻链分子量 25 kDa，5 ng 对应 0.2 pmol。WB 上样 10 μL，A25022 1:5000 稀释，灰度值 50–3200 AU，线性区间 R2 0.999。超过 5 ng 进入平台，信号不再增长，提醒用户稀释 IP 洗脱液，避免“假平台”误判。

4. 交叉反应：小鼠、大鼠、人 IgG 轻链 <0.1%

ELISA 阵列测试 7 物种：小鼠、大鼠、人、猴、羊、牛、鸡。OD450 均 <0.05，相当于 <0.1%。做多物种血清 IP，膜上 25 kDa 区不会出现杂带，省去预吸附封闭步骤，时间省 30 min。

5. 稀释稳定性：1:5000 工作液 4 ℃ 7 天，活性降 <5%

kcat 值高，稀释后仍稳定。1:5000 工作液 4 ℃ 存放 7 天，kcat 由 27000 降到 25700 s?1，降幅 4.8%。WB 条带灰度降 5%，仍在 5% 系统误差内。短期项目可一次性配 50 mL，减少批次操作误差。

6. 滤光片兼容性：化学发光与近红外双读数

HRP 底物既可用传统 ECL，也可换近红外增强型底物（Cy5 显影）。 Odyssey 扫描 700 通道，0.1 ng 轻链条带信噪比 18:1，与 520 nm 化学发光结果一致，实现“同膜双读”，方便归一化总蛋白。

7. 批次差：kcat 值写进 COA，换批免标曲

每批 A25022 出厂测 kcat，数值印在 COA，范围 27000±1000 s?1，CV<4%。在同一实验室，换批号无需重跑定量标准，直接替换即可，节省 2 h 标准曲线时间。