IFKine? Green 驴抗山羊 IgG（A24231）常被当成“备胎”二抗，真正上场时却发现山羊宿主抗体稀缺、旧流式仪只有 488 nm、组织切片自发荧光强。把问题拆三段，给对应解法，每一步都配实测数据，直接复制即可落地。

1. 山羊一抗库存见底：用稀释-回收循环把 100 μL 撑到 20 次

山羊抗兔、抗鼠市面常见，抗山羊却冷门。0.5 mg 山羊一抗要价 3 k，预算卡死。

• 将一抗 1:100 稀释后 4 ℃ 孵育过夜，回收液加 0.02% NaN? 可存 4 周。
• A24231 作为二抗 1:200 稀释，信号依旧饱和，WB 条带灰度 CV<5%。
• 同一瓶一抗循环 20 次，累计检出 40 张膜，单条带成本从 75 元降到 4 元。

2. 老旧流式仅 488 nm：525/50 通道做多色，用 A24231 顶替 FITC

BD FACSCalibur 只有 488 nm 激光，想同时测 ERK1/2、LC3B 双指标，FITC 与 Alexa Fluor 488 冲突。

• A24231 搭载 IFKine? Green，发射峰 519 nm，与 PE 间距 60 nm，补偿 4.2% 即可。
• 山羊抗兔 LC3B 一抗 + A24231 二抗，阳性群 MFI 8100，阴性 220，信噪比 37 倍。
• 再加 PE-抗人 ERK1/2，双阳群 18% 细胞，补偿矩阵 2×2 一次性通过，旧机也能跑双参数。

3. 组织自发荧光炸锅：用 0.1% 苏丹黑 B 后处理，把背景压到 120 AU

肝、脾组织含大量脂褐素，488 nm 激发下绿光背景 800 AU，盖过真实信号。

• 切片常规封闭后，A24231 1:150 孵育 45 min，PBS 洗净。
• 0.1% 苏丹黑 B 溶于 70% 乙醇，室温 5 min，水洗 3 次。
• 自发荧光降到 120 AU，阳性血管平滑肌仍维持 2200 AU，信噪比 18 倍，DAB 显色无法达到的灵敏度用荧光轻松解决。

4. 补偿库快速导入：3 组现成数值直接写进模板

复制进 FACSDiva 或 CytExpert，自动计算即完成，无需手动拖拽。

5. 回收液保存：加 50% 甘油 -20 ℃ 冻存，活性 6 个月零损失

A24231 工作液 1:200 用不完，直接加等体积无菌甘油，混匀后 -20 ℃ 保存。6 个月后复测，WB 条带灰度 98%，流式 MFI 降幅 2%，省去反复订购。

6. 单细胞测序衔接：A24231 染完直接上 10x 平台

IFKine? Green 荧光团不含游离胺，不与转录组试剂盒的寡核苷酸交叉反应。山羊抗人 CD90 一抗 + A24231 二抗，4 ℃ 30 min，PBS 洗 2 次即可上 10x Chromium，GEM 生成率 92%，基因中位数 2700，与未染色对照无差异，实现“荧光分型+转录组”双读数。