561 nm 激光器越来越普及,真正能跟 PE 错开、又兼容 561 的橙色二抗却不多。IFKine? Orange 驴抗小鼠 IgG(A24311)标称激发 555 nm、发射 570 nm,听起来像 PE 的翻版,拆开 COA 才发现荧光团结构、F/P 比、交叉吸附深度全是定制项。下面把技术参数拆成 6 组,直接告诉你在仪器端怎么落地。
A24311 实测激发峰 555 nm,半峰宽 18 nm;发射峰 570 nm,半峰宽 22 nm。561 nm 激光器激发效率 96%,586/15 滤片捕获 92% 光子。同条件下 PE 激发效率 100%,但发射 575 nm 溢出到 610/20 高达 18%,A24311 仅 6%,做三激光四色时直接省 2 个补偿点。
IFKine? Orange 采用磺化菁-PEG 长链偶联,分子量 1800 Da,荧光团离抗体 4.2 nm,自淬灭系数 0.08。量子产率 0.38,比常规 Cy3 高 15%。换算到流式:1 μg 抗体可产生 1.2×10^7 光子,足够让 561 nm 激光器在 20 mW 功率下把 1×10^4 细胞推到 10^4 MFI。
F/P 比 <2 亮度不足,>4 聚集沉淀。A24311 出厂前通过 A280 与 A555 双波长测定,F/P 严格 2.8–3.2。用户复测公式:
F/P = (A555 × 稀释倍数)/(150000 × 抗体摩尔浓度)
批次 CV<3%,直接保证实验间定量可比,不用每回重跑标准曲线。
驴血清天然含抗人、抗牛、抗大鼠抗体。A24311 过 8 柱混合 IgG 吸附:人、大鼠、仓鼠、羊、牛、猪、鸡、兔。ELISA 检测交叉 <0.15%。小鼠脾脏组织里混入人 CD3 抗体,586/15 通道背景 190 MFI,阳性群 11000 MFI,信噪比 58 倍,省去额外封闭费用。
A24311 浓度固定 0.5 mg/mL,推荐工作稀释 1:100,终浓度 5 μg/mL。用 Rainbow 微球校准,比活性 1.2×10^8 MFI/(μg·10^6 cell)。换算成实验:1×10^6 细胞用 5 μL 原液,成本 28 元,跑 100 次流式,单样本 0.28 元,低于 PE 二抗 40%。
运输箱温常飙 40 ℃。A24311 45 ℃ 14 天加速老化, WB 条带亮度下降 7%,流式 MFI 下降 10%,仍在合格线。收货后即使未及时冷藏,实验结果仍可追溯,减少批次退货纠纷。
| 机型 | 激光 | 滤片 | 阳性 MFI | 渗漏 610/20 | CV n=5 |
|---|---|---|---|---|---|
| BD FACSAria III | 561 nm | 586/15 | 11000 | 6.0% | 3.8% |
| Cytek Aurora | 561 nm | 585/42 | 10800 | 5.9% | 4.0% |
| Beckman CytoFLEX S | 561 nm | 585/42 | 11200 | 6.1% | 3.7% |
| Sony MA900 | 561 nm | 570/14 | 10900 | 5.5% | 3.9% |