1. 它到底叫什么？

行业里同一支抗体至少有五个名字：Goat Rabbit IgG、山羊抗兔IgG、山羊抗兔IgG二抗、山羊抗兔二抗、货号 A23420。

它们指向同一类试剂：山羊宿主、靶向兔 IgG 全分子的二级抗体。叫法不同只是渠道习惯，选的时候认准“Goat anti-Rabbit IgG (H+L)”即可，避免买到只识重链或轻链的片段。

2. 工作原理：一场“接力赛”

• 第一棒：兔源一抗识别组织里的目标蛋白
• 第二棒：山羊抗兔 IgG 二抗带着酶/荧光基团跑过来，Fc 段与一抗的 Fc 高亲和结合
• 第三棒：显色或发光系统被激活，信号放大 103–10? 倍

关键点：二抗的交叉吸附（cross-adsorbed）决定背景干净与否。优质批次会把人、小鼠、大鼠血清跑 4 遍，把能交叉反应的 IgG 先“洗掉”，留下只认兔 IgG 的克隆。

3. 选购指南：5 个参数直接问销售

4. 收到抗体后 10 分钟内的“体检”

1. 离心 5 000 g，5 min，看沉淀；有絮状说明反复冻过
2. 分装 20 μL/管，加 50 % 甘油，–20 °C 避潮；甘油浓度低于 30 % 冰晶会扎破抗体
3. 原始管保留 10 μL“底样”，后续出问题可做 Western 对照

5. 稀释比例不是“玄学”

厂家写 1:5 000 只是起点。把二抗从 1:2 000 到 1:20 000 做 4 个梯度，固定一抗浓度，选信噪比最高的那个点。多数情况下，HRP 二抗在 1:8 000 附近背景最低，荧光二抗在 1:1 000 左右亮度饱和。

6. 背景高？先查“三个 5”

• 5 % 脱脂奶粉封闭 1 h，奶粉过期会结块，封闭失效
• 5 分钟 TBST 洗 5 次，每次 200 mL 膜面积；洗膜液体积低于 100 mL 时游离二抗洗不掉
• 5 ng/mL 的兔 IgG 污染：实验室共用摇床，上一组兔血清洒落，二抗直接“粘”上去。用 0.1 M 甘氨酸 pH 2.5 先洗机器，再跑实验

7. 荧光版“淬灭”急救

Alexa 系列遇甘油会慢淬灭，封片后 4 °C 避光保存不超过 48 h。急着拍图却淬灭，可用 0.5 % 对苯二胺（p-phenylenediamine）溶于 PBS-甘油，抗淬灭延长到 1 周。

8. 旧批次再利用

过期 6 个月内的 HRP 二抗，别扔。Western 转成 ELISA 捕获抗体，包被量提高到 2 μg/mL，照样能做标准曲线，信号值下降 <15 %，省一支新抗体。