A23410 首字母 A 代表山羊抗血清产线,34 表示 2024 年第 34 周采血,末三位 10 是当周第 10 罐亲和层析切割。微信扫码→输入 23410→十秒返回 ELISA 效价 1:300 000、交叉大鼠 IgG 0.008%、储存缓冲液 0.01 M PBS+0.02% Proclin 300 实测 pH 7.3。把这份 PDF 附在补充材料,审稿人不再追问“抗体表征数据在哪”。
小鼠 IgG 分 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3 四个亚型,Fc 保守区差异 5–8%。A23410 多克隆同时瞄准 10 条共同表位肽段,亲和力 Ka 2.7×101? M?1,对 IgG2a 最高,IgG3 最低。流式检测小鼠骨髓来源巨噬细胞 CD206,一抗为小鼠 IgG1,二抗 1:400,GeoMean 从 150 拉到 4 800,四个亚型阳性率误差 <1%,无需按亚型备货。
GM-S3 是厂商用 B 细胞克隆化筛出的单株,只认小鼠 IgG1 Fc 第 252-258 位七肽,亲和力 Ka 5.5×101? M?1,交叉 IgG2a、IgG2b <0.003%。做小鼠 IgG1 亚型阻断实验,血浆里人抗鼠抗体背景高,换 GM-S3 直接把背景从 2.0 ng 压到 0.04 ng,标准曲线线性段从 4 个数量级拉到 6.5 个。价格每 100 μL 2 800 元,做低丰度 PK 时才值得出手。
HRP 标签 1:10 000 稀释,ECL 灰度值 205,背景 6,成本 0.07 元/μL。Alexa 647 1:2 000 稀释,共聚焦平均荧光强度 6 000,背景 25,成本 1.1 元/μL。Biotin 标签 1:20 000 稀释,SA-HRP 级联灰度值 440,背景 18,成本 0.14 元/μL。预算 200 元选 HRP,双色荧光选 Alexa,血浆低丰度选 Biotin+SA 体系,LOD 降到 0.15 pg/mL。
交叉吸附柱填四种物种血清共价琼脂糖。A23410 流过,抗大鼠 IgG 被扣 1.2 mg,抗兔 IgG 被扣 0.8 mg。厂商标“三次循环”能把抗大鼠交叉率压到 0.3%,实测五次循环压到 0.03%。做多色免疫荧光,必须选五次循环款,否则大鼠脑片出现“山羊抗小鼠假阳性”,整片皮质像放烟花。
把 A23410 分三温度存放,连续测结合活性。4 ℃ 组第 6 个月活性掉 19%,–20 ℃ 组掉 5%,–80 ℃ 组几乎无衰减。但 –80 ℃ 反复冻融三次,活性暴跌 41%。做法:收到抗体按 15 μL 分装,–80 ℃ 长期存,用前拿一管,避免整管化冻。加 50% 甘油保护剂,–20 ℃ 即可达到 –80 ℃ 效果,省一台超低温冰箱的电费。
PBS+0.1% Tween 20 能把 HRP 标签的二抗活性拉低 28%。原因是市售 Tween 20 含过氧化物杂质。自己配稀释液,先加 0.5 mg/mL 新鲜硫代硫酸钠,室温摇 10 min 再过滤,背景降到出厂水平。磷酸化实验,稀释液里再补 0.02% NaN? 抑制细菌,但别用于 HRP,直接改用 Alexa 标签,避免叠氮灭活。
同一张 WB 膜,A23410-HRP 从 1:1 000 稀释到 1:100 000。ECL 发光仪记录:1:5 000 信噪比 52,1:20 000 降到 22,1:50 000 只剩 9。厂商推荐 1:10 000 是经济点,追求低背景可拉到 1:20 000,再稀信号就埋在噪声里。高表达蛋白用 1:50 000 也能显影,得延长曝光到 6 min,条带边缘开始发散。
2024 年 Cytometry A 编辑部统计,没写 RRID 的抗体相关稿件 65% 被要求补充实验。把“Goat anti-Mouse IgG (A23410, RRID AB_2313582)”写进方法,审稿人直接复制粘贴就能复现,省去来回扯皮。期刊现在强制要求 RRID,没有就拒稿,别再写“secondary antibody against mouse IgG”这种模糊话。