A23340 首字母 A 代表山羊抗血清产线,33 表示 2023 年第 33 周采血,末三位 40 是当周第 40 罐亲和层析切割。微信扫码→输入 23340→十秒返回 ELISA 效价 1:260 000、交叉小鼠 IgG 0.012%、储存缓冲液 0.01 M PBS+0.02% NaN? 实测 pH 7.4。把这份 PDF 附在补充材料,审稿人不再追问“抗体表征数据在哪”。
大鼠 IgG 分 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 四个亚型,Fc 保守区差异 6%。A23340 多克隆同时瞄准 8 条共同表位肽段,亲和力 Ka 2.4×101? M?1,对 IgG2b 最高,IgG1 最低。流式检测大鼠脾细胞 CD80,一抗为大鼠 IgG2a,二抗 1:400,GeoMean 从 180 拉到 5 200,四个亚型阳性率误差 <1%,无需按亚型备货。
GR-2a 是厂商用噬菌库筛出的单株,只认大鼠 IgG2a Fc 第 325-331 位七肽,亲和力 Ka 4.8×101? M?1,交叉 IgG1、IgG2b <0.005%。做大鼠 CAR-T 药代动力学,血浆里人抗鼠抗体背景高,换 GR-2a 直接把背景从 1.2 ng 压到 0.03 ng,标准曲线线性段从 4 个数量级拉到 6.5 个。价格每 100 μL 2 600 元,做低丰度 PK 时才值得出手。
HRP 标签 1:8 000 稀释,ECL 灰度值 188,背景 7,成本 0.07 元/μL。Alexa 594 1:1 500 稀释,共聚焦平均荧光强度 4 900,背景 28,成本 1.1 元/μL。Biotin 标签 1:18 000 稀释,SA-HRP 级联灰度值 395,背景 19,成本 0.14 元/μL。预算 200 元选 HRP,双色荧光选 Alexa,血浆低丰度选 Biotin+SA 体系,LOD 降到 0.2 pg/mL。
交叉吸附柱填四种物种血清共价琼脂糖。A23340 流过,抗小鼠 IgG 被扣 1.1 mg,抗兔 IgG 被扣 0.9 mg。厂商标“三次循环”能把抗小鼠交叉率压到 0.3%,实测五次循环压到 0.035%。做多色免疫荧光,必须选五次循环款,否则小鼠脑片出现“山羊抗大鼠假阳性”,海马区像放烟花。
把 A23340 分三温度存放,连续测结合活性。4 ℃ 组第 6 个月活性掉 23%,–20 ℃ 组掉 7%,–80 ℃ 组几乎无衰减。但 –80 ℃ 反复冻融三次,活性暴跌 42%。做法:收到抗体按 20 μL 分装,–80 ℃ 长期存,用前拿一管,避免整管化冻。加 50% 甘油保护剂,–20 ℃ 即可达到 –80 ℃ 效果,省一台超低温冰箱的电费。
PBS+0.1% Tween 20 能把 HRP 标签的二抗活性拉低 30%。原因是市售 Tween 20 含过氧化物杂质。自己配稀释液,先加 0.5 mg/mL 新鲜硫代硫酸钠,室温摇 10 min 再过滤,背景降到出厂水平。磷酸化实验,稀释液里再补 0.02% NaN? 抑制细菌,但别用于 HRP,直接改用 Alexa 标签,避免叠氮灭活。
同一张 WB 膜,A23340-HRP 从 1:1 000 稀释到 1:50 000。ECL 发光仪记录:1:2 000 信噪比 46,1:10 000 降到 21,1:20 000 只剩 9。厂商推荐 1:5 000 是经济点,追求低背景可拉到 1:10 000,再稀信号就埋在噪声里。高表达蛋白用 1:20 000 也能显影,得延长曝光到 5 min,条带边缘开始发散。
2024 年 J Neurosci 编辑部统计,没写 RRID 的抗体相关稿件 63% 被要求补充实验。把“Goat anti-Rat IgG (A23340, RRID AB_2313581)”写进方法,审稿人直接复制粘贴就能复现,省去来回扯皮。期刊现在强制要求 RRID,没有就拒稿,别再写“secondary antibody against rat IgG”这种模糊话。