“Goat Rabbit IgG” 不是随意拼写,而是行业通行的“宿主-靶物种-抗体类别”三段式。Goat 代表宿主,Rabbit 指靶物种,IgG 限定抗体类别。只要顺序颠倒,采购系统就会判为不同货号,导致实验批次断裂。A21120 正是 Thermo 体系里把这段命名固化到 SKU 的典型例子。
山羊抗兔 IgG 不直接结合抗原,它识别的是一抗 Fc 段。Fc 段在同种动物里高度保守,因此二抗可以批量生产,形成信号放大层。HRP、Alexa Fluor 488、biotin 三种标记方式分别对应显色、荧光、级联放大三条技术路线。A21120 采用 Alexa Fluor 488,激发 495 nm,发射 519 nm,与 GFP 同窗口,多标实验需提前规划滤光片。
山羊血清预吸附是行业默认工艺,但吸附深度各厂差异大。A21120 在说明书里给出“reacts with rabbit IgG; minimal cross to bovine, mouse, human serum proteins”,意思是 50 μg/mL 以下浓度时,与牛、鼠、人 IgG 交叉 <2%。做牛血清培养细胞时,这一点决定背景是否干净。若实验涉及鼠源一抗,这条指标直接排除掉 A21120,必须换 goat anti-mouse。
厂家给出 1:500–1:2000 的稀释区间,但实验室往往直接取中间值 1:1000 起跑。WB 场景里,0.2 μg/mL 是 A21120 的拐点浓度;低于 0.1 μg/mL 信号衰减呈指数,高于 1 μg/mL 背景呈指数爬升。把膜换成 0.22 μm NC 后,拐点会右移 0.1 μg/mL,因为膜表面积增大,抗体吸附位点增多。
Alexa Fluor 488 共价偶联在 F(ab')2 片段,冻融一次荧光效率下降 <3%,肉眼不可见。但第五轮冻融后,效率跳水至 85%,伴随肉眼可见的絮状沉淀。行业默认分装 20 μL/管,-80 °C 保存,一次用完。若实验室只有 -20 °C,建议加 50% 甘油,把冰点降到 -35 °C,可将荧光衰减周期从 3 个月拉到 9 个月。
A21120 的 Alexa Fluor 488 与 GFP 同窗口,与 FITC 完全重叠。做三标时,若一抗分别是兔、鼠、羊,二抗组合就得避开同波段。行业惯例把 488 留给最强信号,555 给中等,647 给最弱。A21120 占用 488 后,鼠源二抗只能选 Alexa Fluor 555,羊源选 647。滤光片组若只有 FITC/TRITC/Cy5,就得接受 20% 串色,后期用线性拆分算法也拉不回来。
收到 A21120 先别急着签字。把运输泡沫盒温度计记录拍照,-20 °C 运输允许 0 °C 以下 48 h,若记录显示 4 °C 超过 6 h,可直接拒收。离心 30 s,看管壁有无荧光环,出现环状沉淀说明偶联物已析出,退货比做实验更省时间。
A21120 停产时,厂方会给出升级号 A32731。二者宿主、标记、交叉吸附指标完全一致,区别是 A32731 改了缓冲液,从 BSA 换成鱼明胶,降低 IgE 背景。若论文已引用 A21120,换用 A32731 需在补充材料里注明,否则审稿人会质疑批次差异。