A21070 用豚鼠血清IgG 全分子+豚鼠IgG1/IgG2 亲和纯化片段混合免疫山羊,ELISA 测得对IgG1、IgG2 斜率差<3%,保证豚鼠单抗腹水也能被等量捕获。COA 写明不与兔、大鼠、小鼠、人IgG 交叉,OD450 读值全部<0.03,做多色Panel 时可直接把豚鼠通道塞进去,无需额外预吸附。
BLI 实测 KD 0.9 nM,Kon 1.3×10? M?1s?1,Koff 1.2×10?? s?1,属于高亲和慢解离组合。WB 场景里,PVDF 膜上抗原密度低,慢解离让抗体在三次洗膜后仍保留信号;流式细胞仪高抗原密度,10 min 孵育就能饱和,缩短实验流程。
HRP 标记版 RZ≥0.45,A403/A280 比值低于0.4 酶活损失过半,ECL 信号提前衰竭。FITC 版 F/P 摩尔比 4–6,激发 495 nm,发射 519 nm,与PE 重叠系数 0.18,需要补偿 12%。Alexa Fluor 647 版发射峰 668 nm,与APC 间距 20 nm,仪器自动拆分误差<2%,适合四色流式Panel。
| 平台 | 稀释度 | 检出限 | 信噪比 |
|---|---|---|---|
| WB | 1:20000 | 0.3 pg | 15:1 |
| IF | 1:1000 | 0.1 μg/mL 一抗 | 30:1 |
| FC | 1:400 | 10?细胞 | 100:1 |
| ELISA | 1:100000 | 0.02 ng/mL | 20:1 |
WB 封闭奶换成3% BSA,稀释度可拉到1:40000,信号不衰,背景再降30%。
SDS-PAGE 银染显示重链 50 kDa、轻链 25 kDa 条带无杂带,HPLC 面积归一法纯度 ≥98%。残留豚鼠白蛋白 <0.5%,做豚鼠源组织切片时背景 0.04 AU,可忽略;若切片背景仍高,把封闭液里加 1% 豚鼠血清,能把非特异压到 0.02 AU 以下。
原液4 ℃ 存放六周,ELISA 效价掉到初始值的85%,八周掉到70%。-80 ℃ 冻存一年效价无衰减,但冻融五次后掉到88%,建议按单次用量分装到0.2 mL 螺旋盖管,避免-20 ℃ 冰晶反复。荧光标记品避光铝箔纸包两层,4 ℃ 八周亮度衰减<5%,超过十二周呈指数下降,长期唯一选择-80 ℃。
COA 声明与小鼠、大鼠、兔、人、山羊、牛血清蛋白无交叉,实验室把常见物种IgG 全部包被到同一块板,A21070 在1:10000 稀释度下OD450 读值均<0.03,仅对仓鼠IgG 有0.05 的弱信号,序列同源性75%,做仓鼠-豚鼠双标实验需要预先把二抗跑仓鼠IgG 预吸附柱,背景能再降一个数量级。
| 指标 | 数值 | 备注 |
|---|---|---|
| 宿主 | 山羊 | 多点超免疫 |
| 免疫原 | 豚鼠完整IgG+亚型片段 | 全覆盖 |
| 纯度 | ≥98% | SDS-PAGE 银染 |
| ELISA 效价 | ≥1:200000 | 厂家标板 |
| WB 检测限 | 0.3 pg | PVDF 膜 |
| HRP RZ 值 | ≥0.45 | A403/A280 |
| FITC F/P | 4–6 | 摩尔比 |
| Alexa 647 发射峰 | 668 nm | 5 nm 半峰宽 |
| 交叉反应 | 仓鼠IgG 0.05% | 预吸附后可忽略 |
| 4 ℃ 储存期 | 6 周 | 效价剩85% |
| -80 ℃ 储存期 | 24 月 | 效价≥95% |