同一份培养上清，ELISA 试剂盒写 NE，比色试剂写 NA，报告里改 NAd，结果浓度差 30 %。下面六张校准卡把标准品、波长、样本前处理锁到小数点后两位，照单操作可直接通过 LC-MS 比对。

1. 官方 CAS 号：51-41-2 是唯一锚点

不论标签写 Norepinephrine 还是 Noradrenaline，CAS 51-41-2 才是分子实体。遇到供应商写“Norepi base”却给 51-43-4，那是酒石酸盐，分子量差 22 %，摩尔浓度直接漂移。下单前把 CAS 写进采购邮件，错货自动退回。

2. 标准品称重：酒石酸盐水合物含 8.5 % 结晶水，需 109.3 mg 才能配 100 μmol/L

Free base 分子量 169.18，酒石酸盐水合物 337.28。配 100 mL 的 100 μmol/L 工作液，按 free base 只要 1.692 mg，按酒石酸盐需 3.373 mg。称量前先看瓶身标签“as free base”还是“as salt”，差一字就翻倍，标准曲线 R2 直接掉到 0.95 以下。

3. 样本稳定：pH 3.5 0.1 M 高氯酸终止，4 °C 48 h 内测定

NE 含邻苯二酚环，pH > 5 开始氧化，48 h 损失 20 %。消化细胞时直接加 0.1 M 高氯酸酸化至 pH 3.5，16000 g 离心 10 min 去蛋白，上清 4 °C 可稳态保存 48 h。若需邮寄，干冰运输，-80 °C 冻融一次损失 < 5 %，冻融三次损失 18 %，样本管写清“避免反复”。

4. 比色波长：450 nm 读 NE-醌衍生物，570 nm 读空白，双波长差减 0.05 AU

市售比色试剂盒用高碘酸氧化 NE 生成红色醌，450 nm 最大吸收。板底气泡在 570 nm 有散射，设定双波长 ΔOD = OD450 - OD570，可把背景降到 0.05 AU 以下。跳过空白波长，高值孔会被误判为 2.2 μM，实际只有 1.6 μM。

5. 灵敏度守门：LLOQ 0.1 ng/mL，对应 0.59 nM，需加 0.005 % 抗坏血酸保护

0.1 ng/mL 工作液在塑料管里 2 h 降到 0.07 ng/mL，加 0.005 % 抗坏血酸后 4 h 内偏差 < 8 %。做低剂量药物刺激时，把标准品系列同浓度抗坏血酸一起稀释，避免低值点被氧化拉低，曲线斜率变陡，样本结果虚高。

6. 交叉核对：每 10 个样本插 1 个 50 nM QC，LC-MS 偏差 > 15 % 整板重跑

QC 溶液 50 nM 用 NIST SRM 4321 配制，插于板中第 6、36、66 孔。ELISA 读数与 LC-MS 比对，偏差 > 15 % 说明氧化或稀释误差，整板数据作废，重新酸化处理。把 QC 合格截图附在实验记录，审计时可追溯。