网页搜索 Autophagy Related Protein Lc3 A 跳出 300 多件抗体,价格差 10 倍,交叉反应从单条带到杂带满天星。下面 6 张对照表把命名、免疫原、验证方式拆到氨基酸位点,下单前直接复制货号即可。
HGNC 给到的唯一符号是 MAP1LC3A(ID 23168)与 MAP1LC3B(ID 23169)。把“Autophagy related protein LC3 A”写进文章可以,采购单必须改成 MAP1LC3A,否则抗体公司可能发成泛 LC3 多克隆,WB 出现 3 条带解释不清。
做双敲除验证需要同时检测 A 与 B 型。选 clone 2G6(anti-LC3A)识别 Q9H492 的 98-110 aa,选 clone 5F10(anti-LC3B)识别 Q9GZQ8 的 101-121 aa,两段序列无交叉,单克隆抗体 OD 比值差异 > 20 倍,可同时跑一张膜不串道。
全蛋白免疫的 pAb 识别内源 LC3-I 与 II 效率接近 1:1,适合做总量计算。合成肽免疫的 mAb 对 LC3-II 脂化构象亲和力高 5 倍,比值信号被放大,适合低自噬水平样本。血清饥饿模型选 pAb,药物刺激 2 h 模型选 mAb,背景条带直接少 3 条。
正规 COA 里必须附 MAP1LC3A?/? HEK293 裂解液 WB 图,KO lane 无 14/16 kDa 信号才算合格。再加 10× 免疫原肽阻断实验,信号消失 90 % 以上才能排除非特异结合。缺 KO 只给肽阻断,或反之,一律不进入采购清单。
昆虫 LC3 对应 RefSeq NP_001036873,N 端多出 4 aa。常规 mammalian LC3 抗体在果蝇样本里只检出 30 % 信号,定量严重偏低。做果蝇模型直接选 anti-Atg8a clone 4A3,哺乳动物抗体不要硬蹭,避免审稿人质疑抗体特异性。
即使同一货号,不同批次抗体浓度可差 15 %。新批到库先用标准 HeLa 饥饿 4 h 裂解液跑内控,设定 Lab internal ratio 0.75 ± 0.05,超出范围就用旧批继续实验,新批做 1:500-1:2000 梯度再标定,把 CV 压到 5 % 以内,文章数据才经得起返修。