同一管标着 IGHG3、Ig Gamma-3 Chain C Region、Immunoglobulin Heavy Constant Gamma 3、G3m Marker、Immunoglobulin Gm3、Heavy chain disease protein（HDC）的重组质粒，有人能在 CHO-K1 里拿到 4 g/L 完整抗体，有人 24 h 就全是 55 kDa 的“半条链”。差距不在转染技巧，在有没有把技术参数写成可签字的质量协议。下文给出决定 IGHG3 能否高表达、不碎链、低聚集的 6 组硬数字，照单抓药，碎链率直接归零。

1. 铰链长度：62 个氨基酸任何缺失都会出 HDC 条带

IGHG3 铰链区含 11 对二硫，长度 62 aa，比 IGHG1 多 41 aa。

• 参数：核苷酸序列 783–966 bp 必须零缺失，出现 9 bp 缺失就会在还原胶里跑出 42 kDa 的 HDC 条带。
• 验收：让供应商发测序 chromatogram，783–966 bp 区域峰图 Q30 ≥ 90 %，出现套峰直接退货。

2. 二硫配对：11 对必须全配对，错 1 对就聚集体爆炸

非还原条件 IGHG3 应只出现 170 kDa 主带。

• 参数：非还原 SEC-HPLC，170 kDa 面积 ≥ 98 %，85 kDa 半抗体 < 1 %，多聚体 0 %。
• 出现 85 kDa 说明 Cys792–Cys922 未配对，把复性罐氧化还原电位调到 –220 mV，GSH/GSSG = 3:1，可压到 0.5 %。

3. 糖基化占位：N297 高甘露糖型 < 15 %

IGHG3 只有 CH2–N297 一个位点，高甘露糖型过高会假性增强 CDC，与历史临床数据冲突。

• 参数：MALDI-TOF 糖肽，Man5 < 15 %，G2F 60–70 %。
• Man5 > 20 % 要求厂家加 2 μM 甘露糖苷酶 I 抑制剂 kifunensine，能把 Man5 压到 12 %，ADCC 活性回归窗口。

4. 内毒素：体内实验 0.05 EU/mg 是硬天花板

IGHG3 等电点 7.6，正电荷补丁多，内毒素吸附能力比 IGHG1 高 40 %。

• 动态浊度法：1 mg/mL 样品，阳性 0.25 EU/mL，3600 s 内浊度上升斜率 < 阳性 30 %。
• 超限批次用膜吸附法（Sartorius EndoClear 0.2 μm）一步降到 0.02 EU/mg，回收率 85 %，小鼠休克模型不再出现体温骤降。

5. 聚集体：SEC-HPLC 多聚体 < 0.5 % 才能过静脉注射

铰链长且柔性大，0.2 μm 过滤后仍可能留下可溶多聚体。

• 参数：SEC-HPLC 0.5 mL/min PBS，170 kDa 主峰 ≥ 99 %，多聚体 < 0.5 %。
• 多聚体 1–2 % 可用 20 mM 组氨酸 + 150 mM 精氨酸 pH 5.8 透析 4 h，再上 Superose 6 精纯，一步能把多聚体压到 0.3 %。

6. 加速稳定性：pH 5.0 蔗糖配方 40 °C 14 天碎链 < 1 %

运输舱温 40 °C 常持续 2 天，PBS 里 14 天碎链能飙到 10 %。

• 配方：20 mM 柠檬酸、150 mM NaCl、5 % 蔗糖，pH 5.0，蛋白 15 mg/mL。
• 验证：40 °C 14 天，还原 CE-SDS 重链 55 kDa 主带下降 ≤ 1 %，无 42 kDa HDC 条带。不合格批次直接退回，厂家会免费换成精氨酸-谷氨酸体系再发货。