同一管标着 Immunoglobulin G3、IgG3 的重组蛋白，有人能拿到 170 kDa 锋利主带，有人 37 °C 放 24 h 就跑出 42 kDa 的“半条链”。差距不在操作手势，在有没有把行业标准写成可签字的验收单。下文给出决定 IgG3 能否被 GLP、GMP 或 IND 直接采纳的 5 条硬杠杆，每条都附带当场能做的检测方法，照单抓药，返工率直接归零。

1. 完整序列：EU 99-327 必须零移码

IgG3 铰链区 62 aa 是 IgG1 的 2.5 倍，任何 3 bp 缺失都会在还原胶里跑出 42 kDa 的“heavy-chain-disease”条带。

• 行业标准：编码区 783–966 bp 必须零indel，Q30 ≥ 90 %。
• 验收：收到质粒即做 Sanger 测序，783–966 bp 出现双峰高度 < 25 % 才签字放行。

2. 多聚体：SEC 主峰 ≥ 99 %，二聚体 < 0.5 %

铰链长且柔性大，0.2 μm 过滤后仍可能留下可溶多聚体。

• 标准：0.5 mL/min PBS、SEC-HPLC，170 kDa 面积 ≥ 99 %，二聚体 85 kDa ≤ 0.5 %。
• 出现 1 % 多聚体，用 20 mM 组氨酸-150 mM 精氨酸 pH 5.8 透析 4 h，再上 Superose 6 精纯，一步能把多聚体压到 0.3 %。

3. 内毒素：临床前实验 0.05 EU/mg 是硬天花板

IgG3 等电点 7.6，正电荷补丁多，内毒素吸附能力比 IgG1 高 40 %。

• 动态浊度法：1 mg/mL 样品，阳性 0.25 EU/mL，3600 s 内浊度上升斜率 < 阳性 30 %。
• 超限批次用膜吸附法（Sartorius EndoClear 0.2 μm）一步降到 0.02 EU/mg，回收率 85 %，小鼠休克模型不再出现体温骤降。

4. 糖谱：Man5 < 15 %， afucosyl < 6 %

IgG3 只有 CH2–N297 一个位点，高甘露糖型过高会假性增强 CDC，与历史毒理数据冲突。

• 标准：MALDI-TOF 糖肽，Man5 峰面积 < 15 %， afucosyl < 6 %。
• Man5 > 20 % 要求厂家加 2 μM 甘露糖苷酶 I 抑制剂 kifunensine，能把 Man5 压到 12 %，活性窗口回归临床批次。

5. 加速稳定性：pH 5.0 蔗糖配方 40 °C 14 天碎链 < 1 %

运输舱温 40 °C 常持续 2 天，PBS 里 14 天碎链能飙到 10 %。

• 标准：20 mM 柠檬酸、150 mM NaCl、5 % 蔗糖，pH 5.0，蛋白 15 mg/mL，40 °C 14 天，还原 CE-SDS 重链 55 kDa 主带下降 ≤ 1 %，无 42 kDa HDC 条带。
• 不合格批次直接退回，厂家会免费换成精氨酸-谷氨酸体系再发货。