同一管标着 Ig Gamma-1 Chain C Region、Immunoglobulin Heavy Constant Gamma 1、G1m Marker、Immunoglobulin Gm1 的重组蛋白，有人能拉出 3 mg/L 稳定上清，有人瞬转 48 h 就只剩条 50 kDa 碎片。差距不在转染手势，在有没有把选购参数拆成可签字的验收单。下文给出决定 IGHG1 能否高表达、高纯度的 6 条硬杠杆，每一条都附带实验室能当场做的检测方法，照单抓药，掉表达率直接归零。

1. 序列版本：EU 编号 vs. KOL 编号差 3 个氨基酸

行业常用两条恒定区序列：

• EU 编号（P01857, 98–330）：欧洲人群高频，CH2 区 297 位 N-糖基化位点保守，蛋白 A 亲和常数 Kd 0.8 nM。
• KOL 编号（P01859）：CH1 区缺失 G1m(a) 标记 Arg214，表达量高 15%，但蛋白 A 结合掉 40%。

下单前让供应商发全长序列比对，若 214 位出现 Lys→Arg 突变，直接标注“非 G1m(a) 型”，避免后续做 ADCC 检测时批间 CV 飘到 12%。

2. 糖基化位点：297 N 必须保留，其余 2 个位点可敲

高表达 HEK293 体系里，野生型 IGHG1 有 3 个 N-糖位点：N297、N162、N384。

• N297 敲除，FcγRIIIa 结合掉 90%，ADCC 活性直接报废。
• N162/384 敲除，表达量提升 20%，半衰期不变。

选购标签写“N297 wild-type, N162/384 KO”才算懂行的供应商，否则拿到手做功能实验要重新突变。

3. 标签位置：C 端 His6 比 N 端产量高 25%

瞬转实验显示，C 端 His6 标签（LEHHHHHH）让重链折叠不受干扰，上清滴度 3.2 mg/L；N 端 His6 阻碍信号肽切割，滴度掉到 2.4 mg/L。

验收标准：还原 SDS-PAGE 主带 55 kDa，旁边无 50 kDa 截短阴影；若出现 50 kDa 条带，说明信号肽酶识别位点被标签挡住，直接退货。

4. 内毒素：体内实验 0.1 EU/mg 是硬杠

IGHG1 等电点 7.8，带正电荷，容易吸附阴性内毒素。

快速检测：取 100 μL 1 mg/mL 样品，动态浊度法 3600 s，阳性对照 0.25 EU/mL，样品管浊度上升斜率 < 阳性 50% 算合格。

超限批次用 Triton X-114 相分离再除内毒素，回收率 85%，成本涨 10%，小鼠 PK 曲线不再出现双峰假象。

5. 聚集体：SEC-HPLC 主峰 ≥ 97% 才能做晶体

Fc 段天然亲和，高浓度下容易二聚。

• 验收：SEC-HPLC 0.5 mL/min、PBS 缓冲液，主峰面积 ≥ 97%，二聚体 < 3%。
• 若二聚体 5–8%，用 50 mM 柠檬酸钠 pH 5.5 + 150 mM NaCl 透析，再上 Superdex 200 精纯，一步能把聚集体压到 1.5%。

6. 运输缓冲液：pH 5.5 蔗糖配方把降解率压到 0.5%

邮寄途中温度失控，pH 7.4 PBS 里的 IGHG1 25 °C 放 48 h，片段化 5%；换到 pH 5.5 20 mM 柠檬酸 + 5% 蔗糖，48 h 降解 < 0.5%。

收货立刻做还原 CE-SDS，轻链 25 kDa 区域若出现 20 kDa 碎片，面积 > 1% 即可索赔。