同一管标着 BFGF、FGFB、FGF-2、HBGH-2、Heparin-binding growth factor 2 的冻干粉，有人能把原代 MSC 养到 P15 不变形，有人 P3 就全军覆没。差距不在技术，在有没有把选购指标拆成可量化的验收单。下文给出实验室最常用 7 组硬杠杆，每一条都附带现场就能做的检测方法，照单抓药，踩坑率直接归零。

1. 蛋白长度：144 aa 与 154 aa 的价差 12% 藏在哪

行业主流两条序列：

• 144 aa（Ser??–Ser2??）：分子量 16.4 kDa，去信号肽，无血清体系里半衰期 12 h。
• 154 aa（Ala??–Ser2??）：N 端多出 10 个氨基酸，表达量高，成本低 12%，但二聚体峰面积常年 6–10%。

下单前让销售发还原 SDS-PAGE 原图，16.4 kDa 主带旁若出现 32 kDa 阴影，面积占比＞5%，直接砍单。

2. 比活性验收：ED?? 0.1 ng/mL 是红线

把 BALB/c 3T3 铺 96 孔板，每孔 3×103 细胞，6 点梯度 0.02–0.5 ng/mL，48 h CCK-8 读数。

合格线：ED?? 落在 0.05–0.15 ng/mL，对应 WHO 90/712 的 5×10? IU/mg。

实测值一旦飘到 0.2 ng/mL 以外，说明蛋白折叠或肝素结合域受损，整批退货。

3. 内毒素：干细胞实验 0.1 EU/mg 是生死门

FGF-2 等电点 9.6，带正电，容易吸附阴性内毒素。

快速法：取 100 μL 复溶样品直接加重组鲎试剂，15 min 凝胶强度≥0.5 EU/mL 阳性对照即判超标。

临床级项目让厂家加一步 Q Sepharose 层析，成本涨 8%，EU 值能压到 0.05，审评员不再发补。

4. 宿主残留：E.coli HCP 100 ppm 是天花板

大肠杆菌表达批间成本低 30%，HCP 残留常在 50–200 ppm；CHO 表达能把 HCP 压到 5 ppm，却可能带入鼠 IgG。

验收文件：

• E.coli 系统要求 HCP ELISA 报告，限度 100 ppm。
• CHO 系统追加 Anti-mouse IgG ELISA，限度 10 ppm。

两份报告一起交，IND 审评一次通过。

5. 冻干保护剂：海藻糖把聚集体压到 2% 以内

配方决定复溶后是否出沉淀。

• 5% 甘露醇 + 1% 海藻糖：玻璃化温度 Tg’ –32 °C，SEC-HPLC 聚集体＜2%。
• 只用 10% 甘露醇：Tg’ –27 °C，夏季运输温度失控，聚集体能冲到 8%。

收货立刻做 SEC-HPLC，聚集体峰面积＞3% 就启动退换。

6. 存储缓冲液：PBS 里 7 天活性掉 30%，Tris 只掉 5%

FGF-2 在 pH 7.4 PBS 里 4 °C 放一周，活性损失 30%；换到 5 mM Tris-HCl pH 7.6 + 0.1 M NaCl，损失＜5%。

实验室操作：

• 复溶后按 50 μL/管速分，液氮闪冻，–80 °C 存 6 个月活性零下降。
• 第二次融化后无论剩多少，直接丢弃，避免 ED?? 漂移。

7. 批间 CV 值：5% 是项目继续的硬杠杠

同一项目连测 3 批，每批 6 点 ED??，几何平均后算 CV。

算法：

1. ED?? 取 log10。
2. 求标准差 σ。
3. CV = (10^σ – 1) × 100%。

CV＞5% 写邮件让厂家混批，否则下游药效数据会被质疑。