开瓶前 30 min 预冷：把蛋白酶活性压到最低

AFGF 在 37 ℃ 半衰期 2 h，4 ℃ 可延长到 24 h。从 –80 ℃ 取出后先放 4 ℃ 30 min，再开盖，管壁冷凝水不会倒灌进干粉。直接把冻存管握在手心化冻，管壁温度瞬间升到 25 ℃，蛋白酶 K 活性恢复 40%，蛋白 N 端被切掉 6 个氨基酸，活性下降 18%。养成“先冷藏后开盖”习惯，能把批次差异压到 5% 以内。

复溶缓冲液：含肝素 2 IU/mL 是生命线

AFGF 与肝素结合后构象稳定，抗蛋白酶降解能力提高 8 倍。用灭菌水直接复溶，24 h 后活性只剩 60%；加 2 IU/mL 肝素钠，7 天后仍保持 90%。肝素浓度超过 10 IU/mL 会激活血小板衍生生长因子，干扰下游实验。把肝素 stock 配成 100 IU/mL，一次性分装 50 μL，避免反复冻融。

分装体积：≤20 μL/管，一次用完不回头

AFGF 浓度 100 μg/mL 时，20 μL 含 2 μg，足够铺满 96 孔板 4 孔。体积大于 50 μL 的管子，冻融一次后边缘蛋白先失活，形成浓度梯度，下次取样活性偏差 12%。用 0.5 mL PCR 管分装，管壁吸附损失 3%，比 1.5 mL 离心管低一半。管盖写日期+浓度，铅笔字迹 –80 ℃ 不脱落。

储存盒位置：别靠冰箱壁

冰箱壁 –80 ℃ 区域温度波动 ±5 ℃，压缩机化霜时升到 –60 ℃，AFGF 活性每月掉 3%。把分装盒放在金属架上层，远离壁面 5 cm，温度波动缩小到 ±1 ℃，一年活性损失 <5%。盒外贴铝箔反光，减少开门瞬间光照氧化。

耗材更替：吸头低吸附是刚需

普通吸头对 AFGF 吸附量 0.8 ng/μL，取 10 μL 实际只拿到 9.2 μL，活性被低估。低吸附吸头吸附量 0.1 ng/μL，误差可忽略。吸头盒开封后 30 天内用完，超期静电吸附增加 50%。把低吸附吸头放原袋密封，加干燥剂，能把寿命延长到 60 天。

培养皿预处理：明胶涂层减少损耗

塑料表面带负电，AFGF 等电点 9.6，带正电，会被吸附 5 ng/cm2。用 0.1% 明胶 37 ℃ 包被 30 min，阻断负电荷，蛋白损失降到 1 ng/cm2。做血管形成实验时，明胶本身还能促贴壁，一举两得。

过期溶液二次利用：做标准曲线稀释液

过期 1 个月的 AFGF 溶液活性还有 60%，直接丢掉浪费。把它当零活性的“蛋白背景”，做 ELISA 标准曲线时稀释高值样本，能把基质效应降到最低。写实验记录时标注“过期复溶液仅限稀释”，审计也能过关。

清洁流程：用 0.1 M NaOH 灭活残存蛋白

工作台面残留 AFGF 会吸附后续实验的耗材，造成交叉污染。喷 0.1 M NaOH 静置 10 min，蛋白水解成肽段，再用 70% 乙醇擦一遍，能把残量压到 0.1 ng 以下。别用 84 消毒液，氯残留会把新的 AFGF 氧化掉。

记录模板：把“冻融次数”写进编号

每支分装管编号 AFGF-2025-06-21-03（批次-日期-冻融序号），用一次就在序号上画圈。超过 3 个圈直接报废，避免人为记忆误差。Excel 表里自动统计冻融分布，失控溯源 30 秒搞定。