先定样本类型：血清、滑膜液还是细胞上清？

血清 MMP-3 浓度 10–80 ng/mL，滑膜液可冲到 500 ng/mL，细胞上清因诱导条件差异从 0.2 ng/mL 到 2 μg/mL 都有。试剂盒检测上限若只有 50 ng/mL，测滑膜液必须 1:10 稀释，误差被同步放大。下单前在说明书空白处写下预期浓度，选上限≥1000 ng/mL 的型号，可避免二次稀释。

抗体克隆号决定特异性

市售捕获抗体常见克隆 55M-384、3A-5、3A-12。55M-384 识别催化域，遇到 MMP-1 交叉 6%；3A-5 结合铰链区，与 MMP-10 交叉 12%。做关节炎研究，滑膜液里 MMP-1 同步升高，选 55M-384 会把数据虚高。写信给技术支持要交叉反应报告，选交叉<3% 的克隆，能把背景噪音压到可忽略。

酶活性 vs 总量：两回事，价差三倍

活性试剂盒用荧光底物 Mca-PLGL-Dpa-AR-NH?，测的是真正能剪切的分子，单价 1.2 万元/96 孔；总量试剂盒用双抗夹心 ELISA，连前体、结合 TIMP 的复合物一起算，单价 0.4 万元。药效实验要看功能，选活性盒；体检筛查只看趋势，总量盒足够。预算卡得紧，把样本分两份，总量盒筛异常，再挑高值用活性盒复测，成本立降 60%。

校准品溯源：WHO 参考品 92/794 是硬通货

只有标签写“traceable to WHO 92/794”的校准品，才能把结果换算成 ng/mL 并参与多中心比对。部分国产试剂用自制内部标准，数值偏差 25%，文章投出去常被审稿人质疑。让销售发校准品溯源证书，缺 92/794 编号直接换品牌，省得补实验。

预稀释缓冲液：含不含 Tween-20 影响回收率

滑膜液黏稠，加 0.05% Tween-20 可降低基质效应，回收率从 78% 提到 95%。血清样本若也走同一缓冲液，Tween-20 会把部分 MMP-3-TIMP-1 复合物解离，结果虚高 8%。买试剂盒时确认缓冲液配方，滑膜液专用通道和血清通道分开包装，能避免基质干扰。

读板时间窗口：催化底物 30 min 后信号衰减

活性试剂盒的荧光底物在 30 ℃ 半衰期 45 min，第 30 min 读数与第 90 min 读数差 18%。设酶标仪动力学模式，每 2 min 读一次，取 10–20 min 线性区段计算斜率，能把 CV 压到 5% 以下。说明书若写“终点法 60 min”，直接 ignore，按动力学法操作数据才稳。

质控品区间：别把靶值当金标准

高值质控靶值 180 ng/mL，批间允许范围 153–207 ng/mL。新到货先用自家 30 份混合血清定一次靶值，偏差>10% 就把厂家靶值作废，改用实测均值。写 SOP 时把“自建靶值”写进去，审计时不会被挑刺。

运输温度：干冰运输≠全程干冰

部分供应商只在前 12 h 放干冰，后续转冰袋，MMP-3 抗体反复冻融亲和力下降 15%。收货立刻测外观，再抽一管做 20 ng/mL 低值回收，偏差>10% 就拍照拒收。把“全程冷链 -20 ℃”写进合同，出问题可索赔。

过期试剂再利用：校准品可拆，抗体别省

过期 1 个月的校准品可当高值样本，做线性稀释仍能用；抗体包被板过期后背景 OD 从 0.05 升到 0.12，低值样本分辨不出来。把校准品留作质控，抗体板直接报废，能在合规前提下抠出 200 元/盒的剩余价值。