检测下限 ≠ 功能灵敏度

说明书写的 0.05 mg/dL 往往是空白均值+2SD，真正能在 CV≤20% 条件下稳定检出的浓度叫功能灵敏度。把试剂盒自带标准品稀释到 0.1、0.2、0.4 mg/dL，连测三天，计算批间 CV。只有 CV≤20% 的最低浓度才算可用定量下限，别把 0.05 mg/dL 写进申报资料，发补会打回。

线性区间验证：用血清而不用缓冲液

厂商标注 0.1–3.0 g/dL 线性，是用含 0.1% BSA 的 PBS 做的。真实血清里存在 Apo A1 多聚体、脂质复合物，会把线性上限压到 2.2 g/dL。取体检中心高值血清，12000 g 离心 10 min 去掉乳糜，倍比稀释 6 个点，回收率 90–110% 才算过关。超出 2.2 g/dL 的样本用生理盐水 1:1 稀释再测，结果×2 即可。

抗体配对决定特异性

抗 Apo A1 单克隆抗体常见克隆号 5E6、A01、HDL-110。5E6 识别 N 端 1–40 氨基酸，遇到 Apo A1 Milano 变异株会出现 30% 正偏差；A01 结合中央 98–121 区段，不受 Milano 影响，但会与 Apo A4 交叉 2%。做遗传突变筛查优先选 A01，做普通人群体检选 5E6 成本低。说明书没写克隆号就发邮件问，拿到抗体配对表再决定是否下单。

校准品溯源链：WHO SP1-01 是硬通货

只有以 WHO 国际参考试剂 SP1-01 为二级校准品的试剂盒，才能把结果溯源到 IU。缺少这一步，多中心试验的数据无法合并。校准证书里必须写明“校准品赋值通过 SP1-01 稀释，采用五点 S 形 Logistic 拟合”，缺这一行，期刊审稿人会让补充实验。

钩状效应点：高值稀释不是摆设

Apo A1 含量 3.5 g/dL 的样本直接进样，一步法免疫比浊会出现前带钩状，结果反而偏低。把样本 1:2 稀释后再测，实测值×2 与原始信号偏差>15%，即可判定钩状效应出现。试剂盒说明书写“抗钩状至 4.0 g/dL”指的是仪器能报警，不等于结果准确。做体检样本先过一遍 1:2 稀释通道，能杜绝阴性报告。

试剂开瓶稳定性：28 天是极限不是均值

校准品、抗体缓冲液开瓶后放在 2–8 °C，第 7、14、21、28 天各测一次质控，偏差<10% 可继续用。别信“8 周稳定”的口头承诺，Apo A1 抗体在含 NaN? 缓冲液里 35 天就开始聚合，信号下降 12%。把开瓶日期写在瓶身，28 天整批更换，能把失控率压到 1% 以下。

仪器平台差异：速率法 vs 终点法

贝克曼 AU 系列用速率法，读数窗口 30 s，脂血标本 H 指数>800 就报警；日立 7180 用终点法，读数窗口 10 min，H 指数 1200 仍能稳定检测。速率法省试剂但怕脂血，终点法抗干扰强却费试剂。体检中心早晨抽血量大，选终点法可减少重测；科研实验室样本干净，速率法更经济。

质控品靶值区间：不是越窄越好

厂商给的 Apo A1 质控靶值 1.20±0.12 g/dL，相当于 10% 变异。真实人群批间生物变异 5.2%，加上分析变异 3.8%，总误差 9% 已覆盖。把质控区间缩到 1.20±0.08 g/dL，看似严格，只会增加假失控。按 CLSI C24 建议，把区间放宽到 1.20±0.15 g/dL，Westgard 1-2s 规则下误报警率 <1%。

校准频率：每天、每周还是每月？

试剂盒说明书写“每 7 天校准一次”，前提是真空中 2–8 °C 保存。实验室白天开关冰箱 20 次，温差让抗体活性每天下降 1%。把校准间隔改成每 3 天一次，质控图 CUSUM 曲线斜率趋近于零，长期节省重测成本。