1. 标签只写 TWEAK 不够，要认 Fn14 活性才作数

供应商目录把“TNF-SF12”和“TWEAK”混着用，买到手可能缺失受体结合域。下单前核对氨基酸区间：Ala 106 – Leu 249 是人源 TWEAK 最小活性片段，Fn14 结合 EC50 理论值 2–5 ng/ml。COA 不附受体结合曲线，直接跳过，省得细胞没反应再返工。

2. 标签上“无动物”有三层意思，别只看 NAF 标志

真核表达常用 CHO，培养基若加血清会引入牛外泌体 TNF-α，刺激背景飙到 300 pg/ml。选“Animal-Origin-Free”且写明“chemically defined medium”，内毒素 <0.1 EU/μg，做体内实验才能一次过伦理审查。

3. 冻干 vs 液相：25 mM Tris 缓冲液让复溶损失降到 5%

冻干 TWEAK 聚体率 8%，液相储存聚体率 2%，价格却贵 20%。冻干粉用 25 mM Tris-HCl pH 7.6 + 150 mM NaCl 复溶，聚体率可压到 5%；用 PBS 直接溶，离子强度过高，聚体率回到 10%。把缓冲液随蛋白一起下单，省得自己配错再补货。

4. 载体蛋白 0.1% HSA 是隐形保镖，不加吸附损失 40%

TWEAK 等电点 6.4，在 pH 7.4 培养基里带负电，仍会被 PS 管壁疏水位点吸附。厂家预混 0.1% HSA 占位，24 h 回收率 92%；无 HSA 版本回收率 55%，看似便宜，每次多补 2 μg，一周就把差价吃光。

5. 分装体积 20 μl 是临界点，低于 10 μl 蒸发误差 8%

PCR 管 0.2 ml 死体积 3 μl，分装 10 μl 实际只剩 7 μl，浓度被蒸发拉低。改成 20 μl/管，-80℃ 速冻，液面高于死体积，五次冻融 CV<5%。把分装方案写进实验室 SOP，学生换班也能保持批间一致。

6. 活性单位换算：ED50 1 ng/ml 对应 1×10? IU/mg

COA 只给“μg”不给 IU，需要自己换算。WHO 报告 TWEAK 在 3T3/Fn14 报告基因系统 ED50 1 ng/ml，即 1 mg 理论含 1×10? IU。供应商写 ED50 5 ng/ml，比活直接打五折，价格再低也别碰，用量翻倍等于隐形加价。

7. 兼容验证：加 Fn14-Fc 做阻断，信号降到基底才算合格

收到新批号，先跑 20 ng/ml TWEAK 刺激 HUVEC，NF-κB p52 ELISA 读 1.2 OD；同一孔再加 2 μg/ml Fn14-Fc，OD 掉到 0.15，阻断率 87%，证明蛋白功能正交。把这张图附在批次记录，后续数据出问题直接锁定试剂，不再全员背锅。