1. 检测范围与定量下限

• 线性区间：0.1 – 32 ng/mL，覆盖健康人血清 3 ng/mL 到肝纤维化患者 18 ng/mL
• LOD 计算：空白均值 + 3×SD，实测 0.04 ng/mL，比上一代试剂盒灵敏度提升 2.5 倍
• 功能灵敏度：CV ≤ 10 % 的最低值 0.1 ng/mL，可用于早期肿瘤筛查纵向跟踪

2. 抗体对与表位定位

• 捕获抗体：克隆 7-6C，鼠 IgG2a，识别 24-42 aa，位于 N 端区域，耐受糖基化变异
• 检测抗体：生物素标记克隆 102D1，识别 125-143 aa，远离 MMP 结合槽，避免位阻
• 交叉反应：加入 500 ng/mL TIMP-2/-4，信号 < 0.1 %，确保肝纤维化共存基质蛋白不干扰

3. 精密度与回收率

通过 CLSI EP5-A3 验证，可直接写进注册资料

4. 校准品与溯源链

• 主标准：NIBSC 18/164，浓度 15 μg/ampoule，赋值误差 ±2 %
• 7 点曲线：0 – 32 ng/mL，4-PL 拟合 r ≥ 0.998，回算偏差 < 5 %
• 校准频率：每块板独立曲线，禁止跨批次套用，灯源老化斜率漂移 < 3 %

5. 样本体积与预处理

• 上样量：50 μL，1:5 预稀释，稀释液含动物血清封闭异嗜抗体
• 溶血耐受：Hb ≤ 5 g/L 时偏差 < 5 %，溶血指数 ≥ 6 拒绝上机
• 冻存稳定性：?80 °C 6 个月，冻融 3 次浓度下降 8 %，建议分装 50 μL/管

6. 稳定性与加速老化

• 加速老化：37 °C 7 天，回收率 93 %，二聚体 < 2 %
• 开封后效期：2-8 °C 4 周，信号日衰减 0.2 %，第 30 天仍在线性偏差带
• 运输条件：蓝冰 2-8 °C 72 h，夏季温差 > 10 °C 包报废

7. 仪器兼容性

• 酶标仪波长：450 nm 主读，630 nm 参比，带宽 10 nm，OD 线性 0-3.0
• 化学发光升级：SuperSignal Femto，发光信号提升 6 倍，LOD 降至 0.02 ng/mL
• 全自动平台：Tecan Fluent 脚本内置，100 μL 反应体系，CV ≤ 3 %，适合 384 孔高通量

8. 常见问题速查