1. 校准溯源：NIBSC 标准 92/362

Total MMP-9 无国际单位，NIBSC 92/362 重组人蛋白 1 μg = 1 000 AU。试剂盒 COA 必须出现该批号，校准曲线斜率 0.96–1.04，截距 ±2 ng/mL。缺这条，多中心换算系数漂移 12%，文章返修只能重测全套样本。

2. 功能灵敏度与检出限分离

缓冲液检出限 0.1 ng/mL 是理论 3SD，血清基质把背景抬 4 倍，功能灵敏度实际 0.5 ng/mL。采购页索要 6 次血清低值 CV ≤15% 报告，才能覆盖健康人 2–20 ng/mL 的基线，避免“测不到”被质疑灵敏度造假。

3. 线性上限与钩状屏蔽

关节炎滑液 Total MMP-9 可冲到 800 ng/mL。试剂盒标 600 ng/mL 上限，却常漏写稀释线性。选附带 1:20 稀释验证报告、回收率 90–110% 的款，省得自己再花两天摸线性，也避免高剂量钩状把 700 ng/mL 读成 350 ng/mL。

4. 抗体覆盖 pro- 与 active- 形式

Total MMP-9 检测要求抗体同时识别 pro-MMP-9、active-MMP-9 与 MMP-9/TIMP-1 复合物。识别表位在催化域 200–214 区段可三收，落在前肽区 50–60 只能抓 pro- 型。索要抗体位点图，选前者，数据才配得上“Total”字样。

5. 糖基化与氧化干扰

MMP-9 第 120 位 Asn 糖基化占 10%，氧化后活性中心 His 失效。抗体表位远离 371–378 催化锌结合区，才能把糖化/氧化型回收率维持在 95%，否则重症组会被低估 8%。

6. 平台转移斜率：ELISA vs 质谱

ID-LC-MS/MS 用特征肽 SPE-LC 分离，定量下限 0.3 ng/mL。ELISA 要求厂家附 100 例血清与质谱的 Passing-Bablok 回归，斜率 0.92–1.08 才接收，避免同一队列两种平台对不上，临床切点白切。

7. 批间差验收

新批次抽 24 例随机血清，与旧批次平行检测，回归斜率 0.9–1.1，截距 ±3 ng/mL。高、中、低质控各 6 孔，CV ≤8%，偏差 ≤5%。把截屏贴冰箱门，下一批到货先比对，超标直接退货，避免整批数据报废。

8. 设备波长与读数稳定性

TMB 显色 450 nm 主读，630 nm 参比。Total MMP-9 低值 2 ng/mL 对应 OD 0.04，参比能把孔底划痕误差压到 0.005。设定读数窗口 5–30 min，延迟 10 min OD 掉 3%，用双波长差减能把漂移拉回 1%。

9. 校准频率与开瓶稳定性

液体校准品 2–8 °C 开瓶 30 天活性掉 8%，冻干品复溶后 4 h 内用完。写 SOP：每次实验高、低质控各 1 点确认校准，偏差 >5% 重校。把校准曲线斜率自动截图附原始记录，审计直接放行。

10. 环保与废液

终止液 2 M 硫酸，用碳酸氢钠中和到 pH 7 再倒。TMB 含 0.01% H?O?，无重金属，可直接下水。板子 70% 乙醇浸泡后当塑料回收，重复利用读数 CV 翻倍，建议一次性发文章，数据干净。