1. 先认分子：pregn-4-ene-3,20-dione 没有抗原臂

孕酮分子量 314 Da，属于半抗原，必须与大分子载体偶联才能免疫。

** kit 差异点**：

• C3 羰基偶联 BSA 的抗体，对 17α-羟孕酮交叉 6 %，对雄烯二酮交叉 2 %。
• C11 位点偶联的抗体，交叉降低到 1 %，价格贵 15 %，做动物实验选前者，做临床科研选后者。

2. 检测策略：竞争法一条线，灵敏度看 IC50

竞争法标准曲线下降，IC50 越低，能区分的低值越薄。

实战：

• IC50 0.5 ng/mL 的盒子，小鼠动情周期 5 ng/mL 与 15 ng/mL 能拉开 3 个梯度。
• IC50 2 ng/mL 的盒子，低值区信号压缩，同一样本重复 CV 飙到 12 %。

3. 样本体积：25 μL 微量血是电商爆款

• 小鼠眼眶静脉一次采 80 μL，用 100 μL 样本量得杀 2 只，用 25 μL 微量款 1 只搞定，动物伦理一次通过。
• 微量款灵敏度保持 0.3 ng/mL，加价 18 %，比多养 10 只动物便宜 200 元。

4. 线性区间：1–100 ng/mL 外的“隐形平台”

高剂量 hook 起点 120 ng/mL，孕马血清可达 200 ng/mL，直接读数被压到 90 ng/mL。

验证：

• 取 250 ng/mL 样本 1∶2、1∶4 稀释，回算偏差 ≤10 % 的最高点即“实测上限”，多数盒子稳在 80 ng/mL。
• 报告高值统一用 1∶4 稀释，把结果×4，避免平台区误读为“黄体功能不足”。

5. 品牌横评：把同一份 IVF 血清拆 5 份盲测

6. 校准品溯源：WHO 4th IS 13/146 与旧批斜率

2023 年后出厂试剂盒换新批校准品，斜率比旧批高 4.2 %。

换批策略：

• 旧批新批同时测 40 份覆盖 0.5–60 ng/mL 血清，得线性方程 y=1.042x?0.12，后续报告乘校正系数 0.96，保持数据库连续。
• 校准品分装 ?70 ℃，6 个月内偏差 ≤ 3 %，过期继续用会把 1 ng/mL 抬成 1.8 ng/mL，影响小鼠早孕判读。

7. 冷链与效期：运输箱 37 ℃ 48 h 极限测试

• 37 ℃ 7 天加速，校准品偏差 5 %，酶结合物活性降 10 %，背景 OD 升 0.02，仍在允差。
• 收货当天把标准品、酶结合物按说明书分拆存放，板条真空铝箔回温 30 min 再拆，防止冷凝水在孔壁形成非特异结合。
• 效期 12 个月，第 10 个月起每月测一次 QC，偏差 > 10 % 整盒报废，提前 2 个月下单补货。

8. 干扰实验：脂血 + 结合蛋白双重封印

孕酮 95 % 与 CBG、白蛋白结合，竞争法只测游离部分。

释放策略：

• 稀释液含 0.1 % 吐温-20 + 0.5 % ANS，pH 7.4，室温 10 min 把结合型拉到游离侧，回收率 96 %。
• TG > 5 mmol/L 浊度 400 NTU，高速离心 10 000 ×g 10 min 去乳糜，背景 OD 降 0.015。

9. 下单前核对清单

• [ ] 抗体偶联位点写入采购合同，C11 位点交叉 <2 %。
• [ ] IC50 ≤0.5 ng/mL，满足小鼠动情周期区分。
• [ ] 微量血 25 μL，加价 <20 %。
• [ ] 校准品溯源至 WHO 13/146，提供最新 COA 斜率。
• [ ] 冷链记录覆盖运输 48 h，温度偏移 >8 ℃ 即退货。