1. 先拆名字：一串别名到底指什么

TNF-α 的官方符号是 TNFSF2，但文献里还能见到 TNF、TNFA、cachectin、DADB-70P7.1 等写法。它们都是同一基因产物，只是历史命名残留。选购时把“TNF-α”与“TNF superfamily member 2”并列搜索，能把漏网之鱼一次捞全。

2. 样本源决定试剂盒骨架

• 人、小鼠、大鼠三种盒子抗体序列差异≥8%，交叉反应普遍<1%。
• 如果做大鼠血清，直接锁定“Rat TNF-α ELISA Kit”，别把 Human kit 拿来“凑合”，回收率会掉到 60% 以下。
• 做细胞上清选“无血清基质”版本，可避开异源补体干扰；做EDTA 血浆要确认说明书里写了“抗凝剂兼容”，否则螯合剂会把酶标二抗的活性中心掐死。

3. 灵敏度不是数字游戏，而是信噪比

厂家把灵敏度标到 0.5 pg/mL 很容易，靠的是把零孔标准差放大 3 倍。真用到实验里，背景 OD 值飙到 0.15，低值样本照样分不开。

实战判读：

• 拿 10 个真实零浓度孔，算平均 OD+2SD，对应浓度就是“功能灵敏度”，通常比官方标值高 3–5 倍。
• 功能灵敏度 < 5 pg/mL 的大鼠 TNF-α 试剂盒，才能测出基础状态下的血清低值。

4. 回收率与稀释线性：两步戳破广告滤镜

• 回收率：把 100 pg/mL 重组大鼠 TNF-α 加进未检出血清，测得 80–120% 算合格；<70% 提示基质效应或抗体亲和力跑偏。
• 稀释线性：高值样本用校准稀释液 1∶2、1∶4、1∶8 逐级稀释，回算浓度偏差≤15%。若稀释倍数越大测值反而升高，说明样本里存在嗜异性抗体（HAMA/HA），需要追加封闭步骤或换“HAMA 阻断”专用盒。

5. 批间差与有效期：把 COA 翻到第二页

每批试剂盒都会附一张 Certificate of Analysis，重点看：

• 标准品实测浓度：与标称值偏差≤10%。
• 批间 CV：用同一质控品连测 3 批，CV≤12%。
• 有效期写 12 个月，但冷链断过一次就会提前 2 个月报废；收货当天把板条、标准品、HRP conjugate 立刻按说明书温度分拆存放，能把衰减曲线拉平。

6. 预包被板 vs. 现配抗体：时间成本换算

• 预包被板：拆开即用，适合样本量 < 200 个/月；板子拆封后 4 ℃ 只能稳 4 周，超期会出现边缘效应。
• 现配抗体对：买抗体对 + Streptavidin-HRP 自己包被，成本降 40%，但包被、封闭、干燥要 2 天；适合每天跑 4 块板以上的高通量实验室。

7. 品牌横向对比：把同一样本拆成 3 份盲测

数据自己测一次，比看宣传页靠谱。

8. 下单前的最后一张清单

• [ ] 确认样本种属、抗凝剂、检测范围。
• [ ] 索要最新批号 COA，核对标准品浓度。
• [ ] 问清是否含“HAMA 阻断剂”或“补体灭活”组分。
• [ ] 冷链运输是否提供 48 h 温度记录。
• [ ] 售后技术支持能否 24 h 内给出实验故障回复。