实验室里动辄几千元的试剂盒，一旦买错批次，时间、经费、动物模型全都打水漂。把“Mouse TNF-α ELISA Kit”这几个单词拆开来读，其实藏着厂商不会主动告诉你的筛选密码。下面把选购流程拆成六步，每一步都给出可量化的判断标准，照着打分就能在 10 min 内筛掉 90 % 的雷区。

1. 先锁定靶标：TNF-α 的 11 个别名怎么对？

TNF-α 的官方基因符号是 Tnfa，蛋白层面常写成 TNF-alpha、cachectin、TNFSF2。有些老牌试剂盒仍沿用 DADB-70P7.1、APC1 protein 等旧称。

快速核对法：把说明书里的“Gene ID”一栏直接黏到 NCBI Gene 数据库，只要对应 MGI:104798（小鼠），就说明靶标配型正确；出现 TNFSF7 或 TNFSF1 直接淘汰，那是 LT-α 或 CD70 的家族成员，交叉反应风险极高。

2. 抗体对来源：单抗＋多抗 ≠ 一定最好

高灵敏度（<1 pg/mL）的试剂盒大多采用“小鼠单抗捕获＋兔多抗检测”的杂交体系。单抗保证位点特异，多抗放大信号。

关键指标：

• 捕获抗体克隆号：MP6-XT22、XT3/XT22 这对组合在 JAX、Charles River 的验证文献里出现频次最高，交叉反应 <0.5 %。
• 检测抗体亲和层析次数：≥2 次 Protein A/G 纯化才能去掉兔 IgG 杂带，降低空白 OD。

3. 标准品溯源：E.coli 重组还是真核 CHO？

CHO 表达的糖基化 TNF-α 更接近天然构象，做细胞上清选它；E.coli 非糖基化版本批间差小，做血清基质更稳。

选购技巧：说明书“Source of Standard”一行如果写“recombinant protein expressed in E. coli*(*Mouse)”，后面没有糖基化备注，默认是非糖基化；写“expressed in mammalian cells”才是真核。

4. 灵敏度与线性区间：别只看最低检测限

厂商常把灵敏度吹到 0.1 pg/mL，却避谈 80 % 回收率的线性下限。

实测方法：

• 把 1000 pg/mL 标准品用样品稀释液 1:2 连续稀释，回收率落在 80–120 % 的最小浓度就是“可靠灵敏度”。
• 血清样本通常比缓冲液掉 30 % 信号，因此细胞上清灵敏度 2 pg/mL 的盒子，到血清里实际 6–8 pg/mL 才可信。

5. 预稀释与基质效应：厂家给的“Sample Diluent”够不够？

小鼠血清里富含 RF 因子、补体，容易把 TNF-α 聚合成三聚体，导致高估。

验证步骤：

• 取 3 只 C57BL/6 小鼠 LPS 刺激 4 h 血清，分别用 1:2、1:5、1:10 稀释，测得值×稀释倍数后偏差 <10 % 的最小稀释比即为“最小需求稀释度”（MRD）。
• 若 MRD>1:5，优先选含“ heterophilic antibody blocker ”的试剂盒，可省下额外 1 h 封闭步骤。

6. 批次稳定性：把 COA 翻到第三页

每批盒子附带 Certificate of Analysis，第三页通常有“Inter-batch CV”。

红线标准：

• 标准曲线三点（15、50、250 pg/mL）CV 必须 ≤8 %。
• 真实样本（ED50）CV 超过 10 %，直接换货。

7. 价格与售后：算单孔成本，而不是整盒报价

96T 盒子标价 3600 元，拆成 80 个可测孔，单孔 45 元； competitor 的 2×96T 标价 6000 元，单孔 31 元。

隐藏成本：

• 不含封板膜、不含洗液浓缩液，自己配一次洗液成本 200 元。
• 售后承诺“7 天内免费重发”写进采购合同，运输途中 37 °C 暴露导致标准品失活，厂商必须无偿补发。

8. 快速比价清单（打印出来贴冰箱）

把 8 项全部打钩的盒子拉进购物车，基本不会踩坑。