01 先搞清楚：你测的是哪种“IL-1β”

IL-1β 的别名多到让人眼花：IL1B、IL-1、IL1-BETA、IL1F2、catabolin、pro-interleukin-1-beta……

在选购小鼠白介素-1β ELISA试剂盒前，先确认样本类型与物种。

• 血清、血浆、细胞上清、关节滑液、脑脊液，蛋白丰度差异可达两个数量级。
• 大鼠、人、小鼠的序列同源性 65 %–80 %，交叉反应不一定覆盖。

把样本来源、预计浓度区间、检测目的（定量 vs 筛查）写在便签上，贴到显示器边框，后面每一步都要回头对照。

02 捕获抗体克隆号：决定灵敏度的第一关

同样是“Mouse IL-1β ELISA Kit”，不同品牌克隆号可能完全不同。

• MP3-3A8 + Polyclonal 检测组合，对 31.3–2 000 pg/mL 区间线性最好。
• B122 + biotin-B122 自身配对，背景低，但天然样本回收率只有 75 %。

向厂家索要抗体配对表（Capture–Detection Matrix），把回收率、LOD、LLOQ 三行数据拉进 Excel，用条件格式标红低于 80 % 回收率的组合，五秒就能筛掉一半鸡肋货。

03 标准品溯源：别让“赋值为 0”的曲线拖垮整板

标准品来源分三种：E.coli 重组、CHO 表达、昆虫细胞表达。

• E.coli 缺乏糖基化，活性蛋白与天然蛋白抗体识别效率差异 10 %–25 %。
• CHO 糖基化接近天然，但价格贵 30 %。
• 昆虫细胞折中，国内主流品牌（KET7005 系列）采用 High-5 表达，赋值对标 NIBSC 93/668。

下单前让厂家出具标准品 COA，看赋值是否可溯源到国际标准；没有的话，实验再漂亮也发不了高水平文章。

04 板内精密度与板间漂移：把 CV 压到 5 % 以内的实操

• 预包被板抽真空铝箔袋开封后，湿度 60 % 环境下放置 30 min，吸附效率下降 8 %。
• 标准品溶解放置 2 h 后，浓度每 30 min 下降 1.2 %。

实验流程：

1. 标准品现配现用，溶后 10 min 内上样。
2. 采用“半量法”：50 μL 样本 + 50 μL 稀释缓冲液，信号值降低不到 10 %，却能把 Hook 效应延后 1.5 倍。
3. 双波长 450/630 nm 读数，板内 CV 控制在 4 % 以下；板间用 QC 样本做 Shewhart 图，漂移超过 15 % 整批重做。

05 样本处理：溶血、脂血、补体三步灭活

• 溶血 > 1 % 时，游离 Hb 在 405 nm 处吸光度叠加，假阳性率升高 3 倍。
• 甘油三酯 > 3 mmol·L?1，采用 PEG 6000 沉淀 10 min，12 000 g 离心去脂，回收率 92 %。
• 补体激活会裂解 IL-1β，56 °C 30 min 热灭活后活性保留 95 %，蛋白浓度不变。

把这三步写成 SOP，贴到样本接收窗口，新手也能零失误。

06 维修保养：让试剂盒寿命从 6 个月延长到 18 个月

• 未拆封试剂盒 4 °C 存放，每月信号衰减 1 %；?20 °C 冻存标准品，一次冻融活性下降 7 %。
• 拆封后捕获抗体板放回铝箔袋，加 3 g 干燥剂，封口夹夹紧，4 °C 存放 8 周仍保持 95 % 活性。
• HRP-链霉亲和素对光敏感，棕色瓶避光，每两周测一次空白 OD，升高 0.02 立即淘汰。

建立“试剂寿命追踪表”，用二维码扫描批号，自动提醒剩余有效期，实验室审计零缺陷。

07 价格与渠道：如何把单孔成本压到 12 元

国产 KET7005 96T 渠道价 1 100–1 300 元，折合 11–13 元/孔；进口品牌 2 200–2 800 元。

• 找一级代理签年框，承诺季度采购 8 盒，可拿到 75 折。
• 拼单采购：联合隔壁课题组凑 20 盒，物流费均摊，每盒再降 40 元。
• 注意“分装版”陷阱：48T 拆卖往往是 96T 对半分装，标准品体积减半，误差翻倍。

把合同里“标准品体积、克隆号、溯源证书”写进违约条款，出问题直接退换，避免口嗨扯皮。