1. 检测目标确认：前体 31 kDa 与成熟 17 kDa 同在一个盒

IL-1α 前体在细胞内占 80%，释放后由钙蛋白酶剪切成 17 kDa 成熟形。抗体若只抓成熟段（112-270 aa），前体阳性样本会被低估 40%。选“total IL-1α”试剂盒，抗体对覆盖 71-90 aa 共同区，前体与成熟形回收率差异 <5%，做全身炎症模型不会漏掉胞内池。

2. 灵敏度档：功能灵敏度 4 pg/mL 覆盖 95% 健康小鼠

健康小鼠血清 IL-1α 中位 8 pg/mL， LPS 诱导 6 h 峰值 600 pg/mL。厂家标 LOD 1 pg/mL 用缓冲液算出，血清 20% CV 对应 4 pg/mL。低于 4 pg/mL 数据 CV 25%，写文章分不了组，直接把 LLOQ 设在 4 pg/mL 比追求 1 pg/mL 更实用。

3. 校准品溯源：NIBSC 86/680 是唯一能追的冻干前体

86/680 定值 1000 IU/支，约 10 ng IL-1α 前体。厂家用 86/680 锚定，偏差须 <±8%。COA 附“主校准品-次级校准品斜率比”原始记录，缺这一项，换批号后 200 pg/mL 质控偏差 25 pg/mL，统计 p 值直接消失。

4. 抗体对表位：71-90 aa 区避开糖基化，前体/成熟差异最小

71-90 aa 无糖基化位点，捕获抗体 4A12 识别该段，前体与成熟 KD 差异 1.3 倍。选 112-125 aa 成熟特异区，前体回收率 60%，做巨噬细胞裂解液会虚低。说明书标注“recognizes both precursor and mature form”才放心。

5. 动态范围 4–500 pg/mL 够用，细胞裂解液需 1:10 稀释

RAW264.7 裂解液 1×10? 细胞含 3–8 ng IL-1α，稀释 1:10 后落在 300–800 pg/mL，超出上限 500 pg/mL。把裂解液用 PBS + 0.1% Triton X-100 1:20 稀释，回收率 95%，避免二次稀释。

6. 板条可拆：96T 拆 4 次用完，校准品冻融 5 次损失 6%

校准品不含甘油，-20 °C 结冰，冻融 5 次浓度从 400 pg/mL 降到 376 pg/mL，低端 8 pg/mL 点 CV 由 6% 升到 10%。选独立铝箔袋 8T×12 条，拆封后 4 °C 放 4 周信号无衰减，整板包装拆封后 4 周校准品 OD 下降 0.04，相当于 5 pg/mL 漂移。

7. 基质干扰：溶血血红蛋白 >2 g/L 假升 10 pg/mL

血红蛋白过氧化物酶活性催化 TMB，溶血样本 OD 升高 0.06，相当于 10 pg/mL 假阳性。用 0.5% 曲拉通 1:2 稀释，56 °C 5 min 灭活，背景 OD 从 0.07 降到 0.02，IL-1α 回收率保持 96%。

8. 售后：数据异常 24 h 内给实验复核方案

IL-1α ELISA 常见异常：空白 OD>0.1、前体/成熟比例异常、回收率 <85%。优质供应商附“异常数据回传模板”，48 h 内给出替换抗体或补偿试剂。合同里写清：若复核确认试剂缺陷，厂家承担样本重测费用，按每样本 120 元计算。