1. 检测下限定 0.1 ng/mL 是噱头，血清稀释 1:50 000 后功能灵敏度才 7 ng/mL

厂家用 PBS 空白+3SD 算出 LOD 0.1 ng/mL，真加到血清里，20% CV 对应 7 ng/mL。健康人 IgG 约 8–16 mg/mL，稀释 1:50 000 后落在 160–320 ng/mL，远高于 7 ng/mL。低端灵敏度只对脑脊液、泪液有用，研究血脑屏障选 0.1 ng/mL 档，普通血清检测买 10 ng/mL 档足够，省一半试剂费。

2. 动态范围 0.5–300 ng/mL 够用，但高值校准品聚合会让平台提前

IgG 浓度>150 ng/mL 时，Fc 段疏水聚集，抗体结合位点被掩，OD 提前进入平台。把校准品加 0.05% Tween-20 + 0.5 M 精氨酸，平台上限推到 400 ng/mL，高值样本无需二次稀释，批间 CV 由 9% 降到 4%。

3. 亚型干扰：IgG1–4 识别表位差 5%，类风湿因子 RF 可假升 15%

捕获抗体用抗-Fc 多克隆，识别 4 亚型总偏差 <5%。类风湿因子 IgM-RF 结合 IgG Fc，形成 RF-IgG 复合物，被夹心法当成“双抗”读成 15% 假高值。RF>100 IU/mL 样本用 0.5 M NaCl 稀释，RF 解离，回收率回到 98%，高盐不影响抗体配对。

4. 校准品溯源：WHO NIBSC 67/86 是唯一能追溯的冻干血清

67/86 定值 11.4 mg/支，复溶后 1 mL 含 11.4 mg IgG。厂家内部主校准品用 67/86 平行标定，偏差须 <±5%。COA 附“次级-主校准品斜率比”原始记录，缺这一项，换批号后 10 mg/mL 质控偏差可达 0.8 mg/mL，临床参考区间直接漂移。

5. 板内 CV<3% 靠 22 °C 恒温，非室温

IgG 分子大，扩散慢，22 °C ±0.5 振荡 400 rpm，结合效率最高。室温冬天 18 °C 板内 CV 5%，夏天 26 °C 背景 OD 涨到 0.06。恒温振荡器投资 6 k，能把批间 CV 压到 4%，写文章不用反复验证。

6. 样本稀释液：PBS-T 加 0.5% PEG6000 能把聚合损失降到 2%

IgG 高倍稀释易吸附管壁，PBS-T 里加 0.5% PEG6000，形成亲水膜，回收率由 88% 提到 98%。脑脊液样本用同款稀释液，1:10 稀释即可上板，避免低丰度样本被稀释误差淹没。

7. 稳定性：校准品 4 °C 放 4 周下降 6%，-80 °C 分装 50 μL 用完即扔

校准品含 0.02% 硫柳汞，4 °C 放 4 周浓度从 200 ng/mL 降到 188 ng/mL，低端 5 ng/mL 点 CV 由 4% 升到 9%。分装 50 μL/管，-80 °C 一次用完，冻融 3 次损失 <2%，曲线斜率不变。

8. 读板波长：450 nm 单波长足够，背景 >0.08 先查洗板机

空白 OD 正常 0.02–0.03，>0.08 多是洗板机针口残留。拆洗头 1% 次氯酸钠浸泡 15 min，纯水反冲，背景回到 0.025，比换抗体便宜。