1. 功能灵敏度：60 例零基质 95 % 检出限 ≤ 0.6 pg/mL

说明书“< 2 pg/mL”只是零标准+2SD，注册检要 60 例真实人血清里假阳性 ≤ 1 例。

• 让厂家提供 3 批次、3 天、3 台酶标仪原始 OD，功能灵敏度稳定 0.6 pg/mL 才能写进申报资料。

2. 抗体对表位：锁定 89–103 环，Eosinophil 亚型全覆盖

IL-5 两条链以二硫键交联，89–103 段为受体结合核心，远离 IL-3/GM-CSF 同源区。

• 捕获抗体 clone 5T16 识别 89–103，检测抗体 biotinylated clone 5D4 落在 110–124，交叉 IL-3 < 0.01 %，嗜酸性粒细胞培养上清无需额外阻断。

3. 交叉反应浓度写到 200 ng/mL 才合法

IL-5 与 IL-3、GM-CSF 共用 βc 链，螺旋 Bundle 区 26 % 同源。

• 参数表必须写明“IL-3 200 ng/mL 交叉 < 0.02 %”，缺浓度上限的声明被 CDE 视为无效，发补概率 100 %。

4. 标准品溯源：WHO 2nd IS 94/746 换算 3.2 IU/pg

94/746 活性 5 000 IU/ampoule，继任品 21/368 活性 7 500 IU/ampoule。

• 试剂盒把每 1 pg 校准品标注 3.2 IU，临床实验室可直接 IU 上报，溯源链写进“性能评估表”第 4.2 栏，审计零提问。

5. 线性区间：7 点校准覆盖 1–1000 pg/mL，加权 1/Y2

哮喘急性期血清峰值 800 pg/mL，低谷 3 pg/mL，一条曲线必须包两头。

• 四参数拟合低浓度残差常 > 12 %，改用 1/Y2 加权，1 pg/mL 点准确度从 ±20 % 压到 ±8 %，注册检一次通过。

6. 钩状效应：验证至 50 ng/mL，回收 ≥ 85 %

重度嗜酸粒细胞增多症血清可高达 25 ng/mL，普通 Kit 只验证 5 ng/mL。

• 参数栏直接印刷“Hook 验证至 50 ng/mL”，高剂量样本无需二次稀释确认，节省 2 周临床补充实验。

7. 批间差：斜率 a 值差异 < 4 %，附 10 批 COA 折线图

四参数斜率 a 比末端 CV 更能反映抗体活性漂移。

• 让厂家把 10 批 COA 的斜率 a 做成折线图附在 IFU 附录，审评员一眼判稳定，省去 40 例血清桥接实验。

8. 样本体积：50 μL 血清，稀释倍数 1:2 起步

高敏 Kit 把用量压到 25 μL，稀释倍数低，嗜酸粒细胞裂解液中血红素干扰放大 2 倍。

• 参数表写明“50 μL 血清，1:2 稀释，回收率 90–110 %”，背景 OD 从 0.12 降到 0.04，信噪比提升 3 倍。

9. 运输温控：-20 °C 干冰，箱内温度记录仪 PDF

IL-5 抗体对反复冻融一次活性下降 10 %。

• 选购时索要全程温度记录仪数据，-20 °C 漂移 < 2 °C 的批次才签字收货，冰袋运输直接退货，避免 5 % 标准品漂移。

10. 读数校准：450 nm 滤光片中心波长偏差 ≤ 2 nm

TMB 450 nm 峰宽 30 nm，滤光片 448 nm 与 452 nm 相比 OD 差 7 %。

• 每季度用 NIST 可追溯 OD 1.0 标准玻片校准，偏差 > 2 nm 立即更换滤光片，多中心数据差从 8 % 降到 1 %，省一次补充验证。