SV40 早期区域怎样在 8 μm 孔径的心脏微血管里重新编写细胞命运。

SV40 Large T 的双锁开关

Large T 抗原携带 LXCXE 基序与 pRb 口袋区咬合，同时通过 NLS 序列把 p53 拖进核内降解。心脏微血管内皮原本依赖 pRb/E2F 刹车在 G1/S 边界，锁被打开后细胞周期 20 h 一转，连续传代 60 代仍保持 85 % 存活。SV40 早期启动子自身含 Sp1 位点，心肌成纤维细胞旁分泌的 bFGF 可把 Large T 表达再推高 1.8 倍，周期缩短到 17 h。

微血管表型的分子护照

永生化后 CD31、VE-cadherin、vWF 依旧阳性，流式检测维持 96 %、94 %、92 %；Lyve-1 阴性率 98 %，排除淋巴管漂移。关键变化在剪切响应：eNOS Ser1177 磷酸化基线升高 3 倍，10 dyn cm?2 层流刺激后 NO 产量从 0.8 μM 升到 3.2 μM，与野生型微血管片段无差异。说明 SV40 未破坏剪切力-钙-NO 轴。

三维血管生成模型的实时脚本

在 2 mg mL?1 胶原 I 中混悬 5 × 10? 细胞，加入 50 ng mL?1 VEGF-A，37 ℃ 4 h 出现管腔，8 h 网络长度 8 mm mm?2。SV40 永生化细胞管腔直径 9.2 ± 1.5 μm，与野生心脏微血管 8.7 ± 1.1 μm 无统计学差异。添加 10 μM L-NAME 阻断 NO 合成，管腔塌陷率 70 %，证明 eNOS 功能完整。

氧化应激阈值上移

SV40 激活 NRF2 通路，HO-1 表达提高 4 倍，H?O? 诱导的 ROS 50 % 抑制浓度从 200 μM 提升到 450 μM。高 ROS 环境模拟缺血再灌注，细胞仍保持 85 % 存活，适合心脏缺血药物筛选。

炎症信号放大器

NF-κB p65 核转位基线增加 2.5 倍，TNF-α 刺激 10 ng mL?1 1 h 后 IL-6 分泌 12 ng mL?1，野生型仅 3 ng mL?1。此放大效应在评估抗炎小分子时能降低 EC50 检测限，缩短实验周期。

染色体稳定性监控

传代至 P40 核型仍为 40,XY；未见端粒融合或环状染色体。阵列比较基因组杂交显示 15qD3 区域 2.1 Mb 重复，位于基因荒漠，功能影响可忽略。每 10 代需复核核型，异常率>5 % 即停用。

体内移植追踪

标记 Luc2-tdTomato 双报告基因，尾静脉注射 1 × 10? 细胞到 C57BL/6 小鼠，IVIS 成像 6 h 心脏信号最强，24 h 后肺、肝信号下降 90 %，心脏仍保留 30 %，显示高心脏归巢能力。免疫荧光检测 tdTomato? 细胞与 CD31? 血管共定位率 94 %，无渗漏至心肌间质。