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永生化鹅卵巢颗粒细胞-SV40 选购指南

2025-08-28

把隐藏坑位一次性标红,下单前照单核对。


品系真伪速验:SV40 元件完整度

市面常见“颗粒细胞永生化”标签下,SV40 Large T 缺失 5'端 174 bp 的缩水版本占比超 30%。缺少这段序列,p53 结合域不完整,细胞在 P12 出现衰老 β-gal 阳性率 40 % 以上。索要载体全序列图谱,核对 5'端 EcoRI–BamHI 片段长度应为 2.7 kb,不足即退。


物种来源与批次溯源

鹅品种直接影响 FSH 受体表达量。东北籽鹅与莱茵鹅混群细胞库中,籽鹅批次 FSHR mRNA 高 2.3 倍,更适合激素信号研究。要求供应商提供羽毛毛囊 STR 指纹,匹配率≥98 %。批次号格式建议:GO-SV40-品种缩写-年月日-冻存管号,拒绝无日期批次。


代次红线:P8 与 P25 的分水岭

P8 以前维持原始颗粒细胞表型,FSHR、CYP19A1、STAR 表达稳定;P25 起雌激素分泌跌至 30 pg mL?1,孕酮反而升高,提示黄体化漂移。做卵泡发育研究务必选 P10 以内;仅做病毒包装可放宽至 P20。合同写明“代次不符可全额退款”。


支原体与禽类病毒双重排查

鹅源细胞易携带禽腺病毒与禽痘病毒。要求 qPCR 面板包含:

  • 支原体 16S rDNA
  • 禽腺病毒 Hexon 基因
  • 禽痘病毒 4b 核心蛋白基因

全部 Ct≥38 方可发货。收货后 24 h 内复检,阳性无条件补发。


培养基隐藏成本

标准配方:DMEM/F12 + 10 % FBS + 2 % 鸡血清 + 1× ITS + 1 μg mL?1 FSH。鸡血清批次差异最大,FSH 受体激动活性可差 5 倍。索要鸡血清 FSH 活性质检报告(cAMP 刺激 EC50 ≤ 0.2 IU L?1)。拒绝无检测数据的“通用血清”。


冻存液优化选项

默认 90 % FBS + 10 % DMSO 复苏率 78 %。升级版 7 % DMSO + 3 % 羟乙基淀粉 + 5 % 鸡血清,复苏率可拉到 92 %,加价 8 %。若做单细胞测序,推荐无血清冻存液,基因表达 CV 值下降 1.7 倍。


交付清单与售后窗口

合格发货包内应有:

  • 冻存管 3 支(每支 1 mL,2 × 10? 细胞)
  • SV40 整合位点测序 BAM 文件
  • 支原体、禽病毒、STR 报告 PDF
  • 培养基配方与鸡血清批号

售后响应时间写明 24 h;代次不符或污染 7 d 内可退换,运费卖方承担。


价格与授权边界

学术价 3200 元/批次,商业用途需补差价至 9800 元。合同注明“商业范围包括药物筛选、诊断试剂开发、合同研究”。若后期转做疫苗生产,须追加 GMP 授权,费用另议。