从原代采集到质控放行，每一步都有硬杠杆。

组织采集：毛囊生长期窗口

标准限定生长期毛囊（Anagen VI）占比≥80%。镜下判定：外根鞘透明、毛球部呈深色膨大；任何退行期或休止期混入即判为不合格。供体年龄 18–30 岁，6 个月内无染发、激素或免疫调节药物史。单批次需记录供体性别、部位、采集时间至分钟级，确保可追溯。

原代分离：酶消化梯度

0.1 % 胶原酶 IV + 0.05 % 中性蛋白酶 37 ℃ 振荡 40 min；酶活单位用 Wünsch 法标定，偏差≤5 %。终止液为含 10 % FBS 的 DMEM/F12。过滤网孔径 70 μm 与 40 μm 双层，验证细胞回收率≥85 %。CD200?/CD34? 流式检测作为纯度金标准，阈值≥90 %。

HPV 转导：E6/E7 元件合规

采用整合缺陷型 HPV-16 E6/E7 慢病毒，MOI 2–3；病毒滴度用 p24 ELISA 测定，浓度范围 1–3 × 10? TU mL?1。转导后 48 h 启动 1 μg mL?1 嘌呤霉素筛选 5 d。存活率≥75 % 视为转导成功。每批次需附整合位点报告：允许插入基因间区，禁止插入 TP53、RB1 或 MYC 500 kb 以内。

细胞库分级：Master、Working、Distribution

• Master Cell Bank（MCB）：P5 冻存，100 管，每管 1 × 10? 细胞。全基因组测序、核型、STR 一次到位。
• Working Cell Bank（WCB）：由 MCB 复苏后扩至 P10，分装 200 管。仅需支原体、无菌、存活率三项。
• Distribution Cell Bank（DCB）：WCB 再扩至 P15，供终端用户。发货前复核支原体 qPCR Ct≥35，无菌 14 d 培养阴性。

质量检测矩阵

培养基与添加剂行业标准

基础配方：DMEM/F12（1:1），2 % 炭处理 FBS，1× ITS-X，10 ng mL?1 FGF-2，5 ng mL?1 EGF，0.25 μg mL?1 hydrocortisone。FBS 需经 56 ℃ 30 min 灭活，炭处理去除激素。ITS-X 中的亚硒酸钠浓度误差≤0.5 %。培养箱设定 37 ℃、5 % CO?、5 % O?，湿度≥95 %。

标签与文档链

每支冻存管贴二维码，扫码即得：供体信息、MCB/WCB/DCB 编号、质检报告、储存位置。纸质 COA 同步上传云端，支持第三方审计追踪。运输箱内附温度记录器，-65 ℃ 以下连续 48 h 曲线作为交付凭证。