细胞来源与组织定位

原代细胞取自 18–25 岁男性枕部毛囊生长期组织，显微解剖后剥离外毛根鞘，保留紧贴真皮乳头的基质区。每根完整毛囊可分离 1.2–1.8 × 10? 个基质细胞，CD200?/CD34?/KRT15? 纯度≥92%。SV40 Large T 抗原通过慢病毒 MOI 3 感染，嘌呤霉素 2 μg mL?1 筛选 7 d，获得永生化株 HFDPC-SV40-IM。

基因组整合位点

全基因组测序显示 SV40 片段主要插入 7q21.2 与 12q14.1 两处。7q21.2 插入破坏 SLC25A37 内含子，细胞对铁离子螯合剂 deferoxamine 敏感性下降 40%。12q14.1 插入位于 HMGA2 下游 12 kb，导致 HMGA2 表达提升 3.8 倍，与核型稳定性降低直接相关。荧光原位杂交探针 SV40-FISH 提供批次报告，定位偏差>2 Mb 视为不合格。

倍增动力学

37 ℃、5 % CO?、低氧 5 % O? 条件下，倍增时间 28–31 h；常氧 21 % O? 条件下延长至 42–45 h。P5–P20 维持线性增长，群体倍增水平 PDL≈38。超过 P25 出现倍增时间漂移，每 5 代延长 4–6 h。冻存复苏存活率 85 ± 5 %，台盼蓝排除法测定。

表面标志物表达量

流式十色面板定量：CD49f 97.2 %，CD200 94.8 %，Nestin 89.5 %，α-SMA 1.2 %。黑色素标记 MITF 与 TYRP1 阴性（<0.5 %），确保无外根鞘黑色素细胞污染。β-catenin 核转位率 45 %，提示 Wnt 通路基线活性高，适用于毛发生长激活剂筛选。

生长因子需求

基础培养基选用 DMEM/F12（1:1）+ 2 % FBS + 1× ITS-X + 10 ng mL?1 FGF-2 + 5 ng mL?1 EGF + 0.25 μg mL?1 hydrocortisone。FBS 批次差异>10 % 即导致聚团率上升；每批需做 48 h 贴壁率预实验。FGF-2 采用无动物源重组蛋白，避免 bFGF 抗体污染。

冻存液配方

90 % FBS + 10 % DMSO，含 1× ROCK 抑制剂 Y-27632 5 μM。梯度降温盒 -1 ℃ min?1 至 -80 ℃，次日转入液氮。复苏后 4 h 贴壁率≥80 % 视为合格。长期存储超过 24 个月需复检复苏存活率，低于 75 % 判定为失效。

支原体与病毒检测

每批次出货附带：支原体 qPCR（Ct≥35），SV40 VLP 抗体中和实验（抑制率≥90 %），HIV/乙肝/丙肝/HPV 多重 PCR 阴性报告。接收后实验室需 48 h 内复检支原体，阳性无条件退换。

STR 指纹与交叉污染

16 位点 STR 图谱与 ATCC 原始记录差异<5 %。实验室内部交叉污染通过性别位点 Amelogenin 与 Penta E 高频突变位点比对，确保与其他人源细胞无重叠。

储存与运输条件

干冰运输 48 h 温控记录，全程 -65 ℃ 以下。到货 30 min 内转入液氮，延迟超过 2 h 存活率下降 10 %。随货附带可溯源二维码，扫码即得完整 COA 与测序原始数据。