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永生化人鼻上皮细胞-SV40 选购指南
2025-08-27
把风险点钉在合同里,买到的细胞才能直接开实验。
供体溯源:鼻腔不是随便刮一下
合格批次必须附带电子鼻咽镜截图,显示取材部位为中鼻甲前端 5 mm2 区域。该处假复层纤毛柱状上皮占比 ≥ 90 %,避免因混合鳞状上皮导致 KRT5 异常高表达。供体年龄 18–45 岁,吸烟史 ≤ 3 包年,降低基底细胞 DNA 甲基化背景。
SV40T 插入方式:单拷贝 PiggyBac 优于多拷贝慢病毒
PiggyBac 系统把 SV40T 精准送进 AAVS1 位点,拷贝数 1.02 ± 0.05,后期基因漂移概率低。慢病毒随机整合批次常见 3–7 拷贝,后期核型异常率可飙到 12 %。合同里要写明“整合位点测序报告随货附送”,否则拒绝签收。
表型保真度:三条验证缺一不可
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纤毛方向:扫描电镜图可见密集纤毛束,角度偏差 ≤ 15°。
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屏障电阻:TEER 值 800 Ω·cm2 以上,FITC-dextran 4 kDa 渗透率 < 1 %。
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炎性标记:IL-6、IL-8 基线 Ct ≥ 28,避免高背景干扰后续刺激实验。
质检报告隐藏陷阱:数字单位要看清
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支原体 qPCR 检出限必须写 10 copies/mL,而不是含糊的“阴性”。
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核型分析需附原始 G-banding 图,分辨率 400 带以上,缺失 < 5 Mb 才算合格。
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无菌试验用 14 天观察法,培养瓶直接拍照上传云端,拒绝只给文字说明。
培养基捆绑:无血清与 2 % FBS 差价 300 %
商家常把“专用无血清培养基”打包销售,500 mL 标价 1200 元。实验室已有 BEGM 可直接兼容,省去二次投资。合同里写明“允许使用第三方培养基不影响质保”。
价格暗礁:冻存管规格决定总成本
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1 mL 管 5 × 10? cells,单价 2800 元,够用 6 孔板 3 次。
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0.5 mL 管 2.5 × 10? cells,单价 1800 元,看似便宜,但复苏后贴壁率下降 10 %,实际更贵。
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大批量 5 × 10? cells/管,单价 9800 元,适合高通量筛选,单细胞成本最低。
售后条款:72 小时响应写成硬约束
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复苏存活率 < 85 % 48 h 内补发新批次。
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表型漂移:连续培养 10 代 TEER 下降 > 20 %,商家免费单克隆化一次。
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技术支持:提供 30 min 视频连线指导复苏,拒绝只给 PDF 说明书。
运输温控:干冰重量写在合同里
运输箱内干冰 ≥ 3 kg,48 h 内温度保持在 ?70 °C 以下。物流单号实时同步云端,签收 2 h 内开箱录像留档。