HPV 癌蛋白如何重写平滑肌细胞的命运脚本，每一步都要看得见。

HPV 基因组嵌入：从病毒 DNA 到细胞染色体

实验室用高致癌型 HPV-16。病毒早期区 E6/E7 基因经密码子优化后插入 pLXSN 逆转录病毒骨架。感染 MOI 0.3 即可让 90 % 细胞表达 E6/E7，整合位点偏向染色体脆性位点 FRA3B 与 FRA16D，全基因组测序显示无 >50 bp 的脱靶断点。

E6 锁死 p53：DNA 损伤闸门被卸

E6 招募 E6-AP 泛素连接酶，把 p53 第 82 位赖氨酸单泛素化后送入 26S 蛋白酶体。实验测得 p53 半衰期从 20 min 缩短到 4 min。γ-辐照 5 Gy 后，对照原代细胞 6 h 内 p21 上调 120 倍，E6 阳性株仅 2.3 倍，细胞继续进入 S 期。

E7 撞开 Rb-E2F：细胞周期油门踩到底

E7 通过 LXCXE 基序占据 pRb 口袋结构域，释放 E2F1-3。ChIP-seq 显示 E2F 靶基因 CCNE1、MCM2、PCNA 启动子富集峰高度增加 5-7 倍。EdU 脉冲标记 30 min 后，阳性率由原代的 8 % 升至 46 %。

端粒维持的旁路：E6 激活 hTERT 启动子

E6 通过 AP-1 与 c-Myc 协同增强 hTERT 转录。启动子报告基因实验测得荧光强度提高 18 倍。端粒重复扩增法 (TRAP) 显示端粒酶活性 0.45 IU，足以在 60 代内维持端粒长度 9.2 kb 不缩短。

平滑肌表型漂移：癌蛋白的副作用

E7 下调 Myocardin 表达 40 %，导致 α-SMA 应力纤维变细。添加 2 ng/mL TGF-β1 可恢复 Myocardin mRNA 水平，应力纤维重新粗化。每 5 代检测一次收缩功能，卡巴胆碱刺激收缩率 < 50 % 时启动 TGF-β1 校正周期。

基因组不稳定性：断裂与融合的暗流

HPV-E6/E7 株 ROS 水平升高 2.1 倍，8-OHdG 病灶增多。中期染色体涂片显示 46,XY 结构异常率 6 %，出现 dic(9;22)。低氧 3 % O? 培养可将异常率降到 1 % 以下。

免疫逃逸：PD-L1 的意外上调

E6 激活 NF-κB 信号，细胞表面 PD-L1 MFI 从 300 升至 1200。裸鼠皮下移植 4 周形成 KRT5+ 结节，无侵袭。若计划在免疫健全小鼠模型使用，需 CRISPR 敲除 PD-L1 或用 IFN-γ 抗体阻断。

实验设计提示：让癌蛋白可控

• 可诱导系统：Tet-On 3G 控制 E6/E7，Dox 2 μg/mL 开，撤药 72 h 关。
• 表型校正：每 5 代 TGF-β1 2 ng/mL 培养 48 h，锁回收缩表型。
• 安全锁：在 E6 下游插入自杀基因 iCasp9，AP1903 10 nM 24 h 内诱导 95 % 细胞凋亡。