品类真伪速查：SV40 与 hTERT 的“双保险”组合

市面上号称“永生化”的细胞株多如牛毛，真正携带 SV40 早期区域与 hTERT 双元件的却不到三成。先查载体图谱：SV40 片段应完整覆盖 Large T 与 Small T 编码区，缺失任何一段都会削弱 p53/Rb 通路的失活效率；hTERT 表达框必须含 Kozak 序列与 WPRE 增强子，缺失则端粒酶活性在 P15 后骤降。要求供应商出具 Southern blot 与 TRAP assay 原始胶片，拒绝仅提供“PCR 阳性”截图的卖家。

代次红线：P5 还是 P50？

永生化≠无限同质。SV40+hTERT 细胞在 P5-P15 维持上皮形态与 TEER 值≥800 Ω·cm2；P20 起出现波形蛋白上调、E-cadherin 边缘模糊，提示 EMT 漂移。做气液界面模型务必选 P10 以内批次；若仅用于提取蛋白，P25 仍可接受，但需同步检测 β-gal 衰老标记。合同中写明“代次不符可退货”，并约定检测方法为流式双染（EpCAM+/Vimentin-）。

支原体与 HPV 隐形污染

鼻腔上皮易被支原体与高危 HPV 交叉感染，导致 NF-κB 通路异常激活。要求供应商提供当月支原体 qPCR 与 HPV 16/18 E6/E7 检测结果，不接受“定期抽检”话术。收货后 24 h 内做 Venor GeM 一步法验证，Ct>35 方可入库。若实验室共用液氮罐，建议额外做一次 16S rDNA 测序，避免交叉污染。

运输温控：干冰还是液氮？

SV40+hTERT 细胞对温度波动极敏感。冻存管从液氮取出后 30 s 内升温至-80 ℃即出现冰晶重结晶，复苏存活率跌落 15%。优选干冰运输附带温度记录器，全程低于-65 ℃且波动不超过 5 ℃。收货时若记录曲线出现“尖峰”，立即拍照留证并拒收。

培养基暗坑：BPE 浓度决定命运

官方 Protocol 常写“添加 BPE 2%”，却未注明是“组织提取级”还是“重组级”。前者含 TGF-β 批次差异高达 10 倍，直接决定纤毛分化效率。索要 BPE 的 TGF-β ELISA 报告，浓度≤150 pg/mL 方可用于 ALI 分化。若做病毒侵染实验，改用无 BPE 的 BEGM+ITS 替代，可显著降低背景感染。

价格陷阱：学术价与商业价差距 6 倍

同一株细胞 ATCC 学术价 450 美元，商业授权飙升至 2800 美元。先确认课题是否属于“非商业研究”，若后续涉及药企合作需补差价。部分国内代理以“科研特价”名义出售商业级库存，合同里需加一句“若用于商业用途，买方承担全部授权费”。

售后条款：冻存失败谁买单？

标准售后是“复苏存活率≥70%”，但未写明检测时间点。要求供应商在 24 h、48 h、72 h 各拍一次明场照片，存活率以 72 h 为准。若低于 70%，免费补发一次或退款 50%。同时约定“细胞特性漂移”判定标准：与原代 STR 图谱比对≥80% 视为合格，避免拿到“假永生”细胞。