实验能不能发、药监认不认、投资人信不信，最终都落到标准二字。

细胞身份溯源：供体信息必须追溯到切片

• 供体年龄 45–65 岁，良性前列腺增生手术离体 2 h 内取材，附带完整病理报告与伦理批件。
• STR 16 位点图谱与 ATCC 数据库比对匹配度 ≥ 90 %，排除 HeLa、HTB-9 等常见交叉污染。
• 支原体、细菌、真菌三重检测阴性，分枝杆菌 qPCR 检测 Ct ≥ 35，放行报告随批次公开下载。

遗传改造合规：hTERT 插入方式决定监管分类

• PiggyBac 转座子系统 + EF1α 启动子，单拷贝整合，无抗生素抗性基因残留，符合 FDA CMC 指南 Tier 1 低风险。
• 全基因组测序显示插入位点位于安全港 AAVS1，无 off-target >50 bp 片段，报告符合 ICH Q5B 基因稳定性要求。
• 病毒元件零残留检测：通过 ddPCR 验证 LTR、SV40 ori 等序列 Ct < 35，确保不含可复制型慢病毒。

生物学特性标定：平滑肌身份与功能双验证

• 免疫表型：α-SMA、SM22α、CNN1 流式阳性率 ≥ 95 %，Ki-67 指数 25 ± 5 %，提示保持收缩表型且增殖可控。
• 收缩功能：卡巴胆碱刺激 10 μM，胶原凝胶收缩面积减少 60 % 以上，钙成像峰值 F/F? ≥ 2.5。
• 基因表达谱：RNA-seq 与原代细胞皮尔逊系数 0.91，平滑肌特异转录因子 MYH11、TAGLN 无显著下调。

培养工艺规范：GMP 级 SOP 一字不差

• 基础培养基：DMEM/F12 + 2 % FBS（已 γ 射线灭活）+ 1× ITS + 5 ng/mL bFGF，无动物源胰岛素。
• 包被基质：0.1 % 明胶 37 °C 预铺 2 h，细胞回收率 ≥ 95 %。
• 传代比例：1 : 3，每 72 h 换液，TrypLE 2 min 消化，存活率 ≥ 97 %。
• 冻存液：90 % 无血清冻存液 + 10 % DMSO，程序降温 -1 °C/min，液氮储存 5 年活性 ≥ 90 %。

质量放行与批次档案：一份报告撑起审计

每批次必须附带：

• 形态图（2D & 3D）、STR 报告、核型图、支原体证书、病毒安全证书
• 原始数据保存 ≥ 15 年，符合 21 CFR Part 11 电子记录要求
• 放行签字人需具备 ISO 17025 授权资质，可追溯至 NIST 标准物质

应用边界与风险提示：让实验者心里有底

• 体外用途：药理学模型、毒理学筛查、组织工程支架
• 体内限制：不得直接用于人体移植，裸鼠移植需额外通过 PDX 病原体筛查
• 表型漂移：连续培养超过 50 代需重测收缩功能，若下降 >20 % 启动单克隆复壮