KTD105-CN 把 protein A 密度做到 12–14 mg mL?1 沉降胶，1 mL 胶理论上绑定 25 mg 人 IgG。实际 Co-IP 只敢用到 1 mg 抗体，因为抗体过量会把非特异 Fc 受体蛋白一起拉下。选琼脂糖先看“mg 抗体 mL?1 胶”而不是“mg 蛋白 A mL?1”，前者决定你能放多少裂解液，后者只是广告数字。

粒径 45 μm 还是 90 μm：离心速度差 1 倍，蛋白回收差 5 %

45 μm 细胶比表面积大，蛋白 A 载量高，但 500 g 离心 30 s 胶膜紧压，洗涤时容易裂胶。90 μm 粗胶 300 g 就能沉淀，胶膜松散，IgG 洗脱体积可压到 50 μL，浓度翻倍。磷酸化信号弱，优先选粗胶；丰度蛋白做质谱，细胶更省抗体。

交联度 4 % 与 6 %：0.2 MPa 是重力柱与 FPLC 的分水岭

4 % 交联琼脂糖耐压 0.3 MPa，适合 4 °C 重力过夜孵育，背景干净。6 % 交联把骨架孔径缩到 60 nm，耐压 0.5 MPa，可上 ?KTA 跑 2 mL min?1，15 min 完成一次 IP。实验室没有层析柜，直接买 6 %，否则流速一高胶就压成饼，柱子堵了还得刮胶重填。

封闭方案：0.2 % 明胶让兔多抗背景直降 70 %

BSA 封闭时，牛 IgG 会与 protein G 结合，银染多出 55 kDa 杂带。改用 0.2 % 明胶，pH 7.4 37 °C 孵育 1 h，封闭剂自身不带 IgG，Co-IP 拉下互作蛋白条带从 12 条减到 3 条，质谱鉴定假阳性直接腰斩。

酸洗脱 pH 2.7：甘氨酸浓度 0.1 M 足够，0.2 M 会把 protein A 一起剥

0.2 M 甘氨酸 pH 2.7 洗脱 10 min，protein A 脱落率 8 %，下游质谱多出 45 kDa 污染肽段。降到 0.1 M 甘氨酸，洗脱 5 min 后立刻 1 M Tris 中和，protein A 残留 < 1 %，胶图干净，质谱数据省一次库搜时间。

再生极限：0.1 M NaOH 循环 3 次载量掉 15 %

protein A 在 0.1 M NaOH 里 25 °C 半衰期 10 min，CIP 15 min 一次，三次后抗体结合效率掉到 85 %。把 CIP 换成 0.5 % 乙酸 + 0.5 M NaCl，寿命拉到 10 次，胶面不会发黄。写 SOP 把 NaOH 浓度锁死，新人不会随手加 0.5 M NaOH 泡一夜，第二天整瓶胶碎成沙。

存储陷阱：20 % 乙醇放 4 °C 一个月长菌

protein A 琼脂糖含 20 % 乙醇，瓶口一开就进气，两周后长出白色菌膜，胶面发臭。分装 50 % 悬液，Parafilm 封口，?20 °C 速冻，用前室温回温，一管一次性用完，背景无杂带。

现场验收：拉 500 μg 裂解液看 IgG 重链残留

新到一盒 KTD105-CN，取 2 μg 抗 FLAG，拉 500 μg 293T 裂解液，洗脱液跑 SDS-PAGE，重链 55 kDa 条带灰度 ≤ 5 % 即合格。5 min 完成验收，比测载量、测粒径省事，现场就能判定退货还是留用。