1. 盒内速览：拆封即可上手的配置

BMR2040提供1 mL/5 mL两种预装柱，柱床高1 cm，柱管适配?KTA Start、注射器、离心机三模式。每毫升树脂含8 mg重组Strep-Tactin，配基密度≥10 nmol/mL，拆封后只需2 CV缓冲液W平衡，5 min进入待上样状态。

2. 裂解缓冲液：离子强度与pH的临界点

Strep II标签仅8 aa，空间位阻小，盐浓度0.15–1 M NaCl均不影响结合；pH 7.0–8.5是最佳窗口，低于6.5时Tactin电荷翻转，载量骤降40%。加入0.05% Tween 20可防止疏水蛋白聚集堵塞柱床。

3. 上样节奏：流速与保留时间的毫米级控制

自然重力流速1 mL/min≈30 cm/h，保留时间2 min即可饱和结合；用注射器推注时保持柱出口滴速2秒/滴，超压风险接近零。?KTA系统设150 cm/h，背压<0.25 MPa，适合50 mL以上发酵液快速捕获。

4. 洗脱策略：生物素VS脱硫生物素的取舍

• 标准洗脱：2.5 mM脱硫生物素缓冲液B，1 CV回收>95%，蛋白活性完整
• 温和降价：用缓冲液B做0–100%梯度，4 CV洗脱，适合后续结晶学
• 应急方案：pH 2.8甘氨酸缓冲液，5 min快速剥离，树脂需立即中和，寿命缩短20%

5. 树脂再生：三步循环让柱床复活

1. 3 CV缓冲液W冲掉残余脱硫生物素
2. 1 CV 0.1 M NaOH去除内毒素
3. 3 CV 20%乙醇保存，4 ℃避光

按此流程循环50次载量仍保持90%，碱洗次数>50后Strep-Tactin脱落率<3%

6. 通量升级：96孔真空板一次搞定

将BMR2040树脂按100 μL/孔分装至过滤板，真空度–0.2 bar，孵育5 min，洗脱2 min，总时长30 min同步处理96个突变体；树脂可回收再用2次，单孔成本降至1.5元，适合表达筛选。

7. 故障急救：现场修正的五个关键词

• 洗脱峰宽：补加5 mM脱硫生物素再洗1 CV，峰宽缩窄30%
• 空白对照高：柱内残存生物素，用5 CV 1 mM HABA预饱和即可
• 背压骤升：样本含DNA，加Benzonase 5 U/mL，37 ℃ 10 min再上样
• 树脂变黄：长期暴露于强光，辅基链霉亲和素氧化，载量下降50%，需更换
• 流速变慢：筛板被细胞碎片堵住，反向推注0.1 M NaOH 1 CV恢复