流式 panel 设计到第 3 色时,信号串扰最先在 488 nm 通道炸开。IFKine? Green 驴抗小鼠 IgG(货号 A24211)被当作“补偿友好”的替补,真正上机才发现批次间荧光强度能差 40%。把 COA 里的参数读透,才能提前算出补偿矩阵,避免二次上样。
A24211 搭载 IFKine? Green,激发峰 495 nm,发射 519 nm,与 Alexa Fluor 488 完全重叠。差异在偶联臂:长链 PEG 把荧光团撑离抗体 3.4 nm,减少自淬灭。实测 pH 4.5–9.0 区间荧光强度漂移 <3%,而传统 AF488 在 pH 6.0 时衰减 12%。做溶酶体共定位实验,酸性环境不再额外拉补偿。
浓度低于 0.3 mg/mL 时,1:50 稀释不能把 CD4+ 群体推到 10^4 MFI,得被迫降到 1:20,补偿值跟着抬高。A24211 固定 0.5 mg/mL,1:100 就能让阴性群留在 10^2,阳性群 10^4,刚好落在流式 4-log 动态中线,不用调电压。
驴血清天然带抗人、抗牛、抗羊抗体。A24211 过 7 柱混合 IgG 吸附:人、大鼠、仓鼠、羊、牛、猪、鸡。ELISA 检测交叉 <0.2%。做多色肿瘤浸润检测,人源组织块里混进小鼠 CD45 抗体,背景依旧压在 200 MFI 以下,省去额外封闭步骤。
荧光/蛋白摩尔比 <3,亮度不够;>4.5,淬灭加剧。A24211 出厂 F/P 控制在 3.2–3.8,每批抽检 5 支。实验者自己测 F/P 只需测 A280 与 A495,套用公式
F/P = (A495 × 稀释倍数)/(73000 × 抗体摩尔浓度)
数值落在 3.2–3.8 即合格,否则免费退换。
用标准微球 Rainbow 3.0 peaks,A24211 在 BD FACSymphony A5 上 488 nm 激发,530/30 通道主峰 98%,渗漏到 575/26 仅 2.7%,610/20 仅 0.9%。把这两组数字直接写进 panel 模板,新用户导入即用,省去 30 分钟补偿调试。
夏季运输常出现 40 ℃ 以上箱温。A24211 做加速老化:45 ℃ 14 天,WB 条带亮度下降 8%,流式 MFI 下降 7%,仍在合格线。收货后即使未及时冷藏,实验结果仍可追溯,减少退货纠纷。
A24211 采用驴源杂交瘤体外培养,单次 12 L 罐,纯化后得 3.2 g,按 0.5 mg/支分装 6400 支。记录显示最近 6 个批次间隔 8 个月,CV 值 4%,保证多中心项目 3 年数据一致性,发文时不再担心“抗体断货”审稿意见。
| 仪器型号 | 激光 | 滤片 | MFI 阳性 | 补偿 575/26 | CV 批次 n=5 |
|---|---|---|---|---|---|
| FACSymphony A5 | 488 nm | 530/30 | 12000 | 2.7% | 4.1% |
| Cytek Aurora | 488 nm | 525/50 | 11500 | 3.0% | 3.9% |
| Beckman CytoFLEX S | 488 nm | 525/40 | 11800 | 2.8% | 4.0% |