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Goat Rat IgG 二抗:技术参数里的隐藏分数

2025-10-30

1. 克隆性质与亚型覆盖

山羊抗大鼠 IgG 多克隆,抗原采用 Sprague-Dawley 大鼠血清完整 IgG,亲和层析后流穿液再跑 SDS-PAGE,只剩 IgG 重链 γ 与轻链 κ/λ,无白蛋白条带。证书里“H+L”代表重链+轻链双识别,做还原电泳时 55 kDa 与 25 kDa 同时显影,避免只抓重链导致的信号丢失。


2. 标记物摩尔比

HRP 版本酶:抗体摩尔比 3.2:1,过高会聚集,过低灵敏度打折。厂家 COA 里写“3–4”是合格区间,拿到手自己测 A403/A280,比值 0.45–0.55 对应 3 个 HRP,超出 0.6 说明偶联过度,WB 背景容易起雾。


3. 交叉吸附深度

参数表一行“Rat IgG-specific, mouse/human adsorbed”背后有具体数字:ELISA 检测小鼠 IgG 交叉 OD 0.028,人 IgG 0.031,均 <0.05。做多色流式时,同一样本含人 CD3 小鼠 CD4 大鼠 CD8,三抗互不干扰,补偿矩阵省一半时间。


4. 总蛋白浓度与体积误差

标称 1 mg/mL,实测 0.92–1.08 mg/mL 属出厂允许漂移。做定量 ELISA 二抗夹心法时,把 ug 换算成真实值,直接代入标准曲线,可把批间 CV 从 12 % 压到 5 %。体积误差同样关键,0.5 mL 包装实际 520 μL,多出的 4 % 在预分装 96 孔板时能多铺 2 列,避免边缘孔空跑。


5. 亲和力常数与动力学

SPR 实测 KD 2.1 nM,Kon 1.9×10? 1/Ms,Koff 4.0×10?? 1/s。Koff 慢意味着 37 °C 孵育 30 min 即可达到平台,无需过夜。缩短时间把非特异结合窗口压缩,高丰度蛋白背景下降 30 %。


6. 荧光标记量子产率

Alexa Fluor 647 版本量子产率 0.33,比 Cy5 高 10 %,但怕甘油。封片剂甘油浓度 >80 % 时亮度衰减 15 %,改用 70 % 甘油 + 0.5 % n-propyl gallate,荧光信号 4 °C 保存 7 天仍维持 95 %。


7. 冻干 vs 液体稳定性

液体 4 °C 放 12 个月,活性降 8 %;冻干复溶后 4 °C 放 6 个月,降 5 %。冻干过程蔗糖:抗体质量比 1:1 做保护剂,复溶用水化液 0.9 % NaCl+0.02 % Tween-20,气泡少,聚集度 <3 %。


8. 批次追溯码

A23440-240512 表示 2024 年 5 月第 12 批,后缀 240512B 为次级亚批,B 代表二次层析柱。文章投稿时把批次写进方法段,审稿人追问重现性,可直接调取厂方留样,Western 条带灰度差异 <3 %,满足编辑部要求。


9. 运输温度曲线

夏天 37 °C 运输 48 h,抗体活性不受影响,前提是包装箱内置相变冰板 4 片,保持 2–8 °C 区间 36 h。收货立刻测温度贴纸,超标到 25 °C 以上可在 7 天内申请免费换新,超 30 °C 厂家直接报废处理,避免用户承担风险。


10. 技术参数表速读清单

拿到 COA 先扫 5 行:浓度、摩尔比、交叉 OD、KD、无菌。任意一项空白,要求补发完整报告,再决定是否签收。把这份 PDF 重命名为“货号-批次-入库日期”,存在本地云端,三年后追溯数据依旧秒查。