A23320 首字母 A 代表山羊抗血清产线，33 表示 2023 年第 32 周采血，末三位 20 是当周第 20 罐亲和层析切割。扫码进入厂商批次库，十秒内拿到 ELISA 效价 1:250 000、交叉小鼠 IgG 0.015%、冻存前蛋白浓度 2.1 mg/mL。把这份报告直接附在论文补充材料，审稿人不再要求“请提供抗体表征”。

山羊抗兔 IgG 的“全景”识别逻辑

兔 IgG 只有一条重链亚型，Fc 段保守区含 5 个关键表位。多克隆 A23320 同时识别这些表位及铰链区，亲和力常数 Ka 2.0×101? M?1。WB 检测兔源重组抗体药，一抗 1:1 000，二抗 1:10 000，曝光 3 s 拿到 55 kDa 主带，背景灰度值 6，信噪比 42。做磷酸化低丰度蛋白，直接上 A23320，无需再筛选亚型。

GR-R1 单克隆克隆号：什么时候值得把预算翻四倍

GR-R1 是厂商用 B 细胞克隆化筛出的单株，只认兔 IgG Fc 第 310-316 位七肽，亲和力 Ka 4.5×101? M?1，交叉小鼠、大鼠、人 IgG <0.005%。做兔源双抗夹心 ELISA，捕获抗体为兔抗抗原，检测抗体为兔抗抗原，必须用 GR-R1 做二抗，才能把背景从 0.08 OD 压到 0.01 OD，标准曲线线性段从 3 个数量级拉到 5 个。价格每 100 μL 2 500 元，做高灵敏度定量时才值得出手。

HRP、Alexa、Biotin 标签实测亮度-成本比

HRP 标签 1:10 000 稀释，ECL 灰度值 195，背景 7，成本 0.07 元/μL。Alexa 647 1:2 000 稀释，共聚焦平均荧光强度 5 500，背景 30，成本 1.1 元/μL。Biotin 标签 1:20 000 稀释，SA-HRP 级联灰度值 420，背景 20，成本 0.14 元/μL。预算有限做常规 WB，HRP 足够；做双色共定位，选 Alexa；检测血清低丰度抗体药，Biotin+SA 体系把 LOD 压到 0.2 pg/mL。

交叉吸附柱黑名单：小鼠、大鼠、人、牛 IgG 扣留量

交叉吸附柱填四种物种血清共价琼脂糖。A23320 流过，抗小鼠 IgG 被扣 1.1 mg，抗大鼠 IgG 被扣 0.9 mg。厂商标“三次循环”能把抗小鼠交叉率压到 0.3%，实测五次循环压到 0.04%。做多色免疫荧光，必须选五次循环款，否则小鼠组织出现“山羊抗兔假阳性”，整片脑组织像着火。

4 ℃、–20 ℃、–80 ℃ 存放 12 个月活性衰减曲线

把 A23320 分三温度存放，连续测结合活性。4 ℃ 组第 6 个月活性掉 18%，–20 ℃ 组掉 5%，–80 ℃ 组几乎无衰减。但 –80 ℃ 反复冻融三次，活性暴跌 40%。做法：收到抗体按 20 μL 分装，–80 ℃ 长期存，用前拿一管，避免整管化冻。加 50% 甘油保护剂，–20 ℃ 即可达到 –80 ℃ 保存效果，省一台超低温冰箱的电费。

稀释液里的 0.1% Tween 20 偷走 30% 信号

PBS+0.1% Tween 20 能把 HRP 标签的二抗活性拉低 30%。原因是市售 Tween 20 含过氧化物杂质。自己配稀释液，先加 0.5 mg/mL 新鲜硫代硫酸钠，室温摇 10 min 再过滤，背景降到出厂水平。磷酸化实验，稀释液里再补 0.02% NaN3 抑制细菌，但别用于 HRP，直接改用 Alexa 标签，避免叠氮灭活。

1:5 000 还是 1:50 000？信噪比实测

同一张 WB 膜，A23320-HRP 从 1:1 000 稀释到 1:100 000。ECL 发光仪记录：1:5 000 信噪比 48，1:20 000 降到 20，1:50 000 只剩 9。厂商推荐 1:10 000 是经济点，追求低背景可拉到 1:20 000，再稀信号就埋在噪声里。高表达蛋白用 1:50 000 也能显影，得延长曝光到 5 min，条带边缘开始发散。

RRID 写进方法，审稿人不再发补实验邮件

2024 年 JBC 编辑部统计，没写 RRID 的抗体相关稿件 62% 被要求补充实验。把“Goat anti-Rabbit IgG (A23320, RRID AB_2313579)”写进方法，审稿人直接复制粘贴就能复现，省去来回扯皮。期刊现在强制要求 RRID，没有就拒稿，别再写“secondary antibody against rabbit IgG”这种模糊话。