分子骨架：IGHG2 基因编码的 330 个氨基酸

• 恒定区起自 Ala114，终止于 Lys443，包含 CH1-铰链-CH2-CH3 四段
• 铰链区仅 12 个氨基酸，比 IgG1 短 7 个，形成更紧凑的“刚性杆”，影响 FcγRIIa 结合角度
• 第 12 位 Cys 形成额外二硫桥，重链-轻链连接更耐还原剂，DTT 2 mM 处理 30 min 仍保持 95 % 完整性

→ 设计还原型电泳实验时，把 DTT 提高到 50 mM 才能完全断开 IgG2 特殊桥接

糖型占比：G0F 高达 60 % 的生理含义

• IgG2 的 N297 糖链以 G0F 为核心，半乳糖基化率低于 IgG1 20 %
• 低半乳糖导致 FcγRIIIa 亲和力下降一个数量级，ADCC 活性天然偏弱
• 岩藻糖缺失突变体（afucosylated）可把 ADCC 拉高 30 倍，但热稳定性 Tm 值降低 2.4 °C

→ 若采购低岩藻糖 IgG2 标准品，要求 COA 给出糖型百分比，误差范围 ±2 %

亚类对照活性：CDC 与 ADCP 的基准值

• 人血清 CDC 实验：IgG2 的 CH50 单位 8.3 U/mg，IgG1 为 24 U/mg
• ADCP 检测：U937 细胞吞噬指数 1.8，高于 IgG1 的 1.2，适合研究巨噬细胞导向
• 与 C1q 结合 KD 1.8 μM，是 IgG1 的 1/5，补体激活阈值需 50 μg/mL 以上

→ 做功能对比时，把 IgG2 浓度拉高 3 倍，否则 CDC 信号淹没在背景里

质控阈值：单体、聚集体、片段三选一

• SEC-HPLC 单体 ≥ 98 %，聚集体 ≤ 1.5 %，片段 ≤ 0.5 %
• NR-CE-SDS 重链+轻链总量 ≥ 95 %，游离轻链 ≤ 2 %
• 还原 CE-SDS 重链纯度 ≥ 98 %，非糖化重链 ≤ 1 %

→ 提交 IND 时，把这三张图谱订成一份 PDF，FDA 审评员习惯先看峰面积表

热稳定性：Tm 值与保存期限的换算

• CH2 域 Tm 71 °C，CH3 域 82 °C，铰链紧凑让整体 Tm 比 IgG1 高 1.5 °C
• 40 °C 加速 4 周，聚集体增长 ≤ 0.3 %，可反推 4 °C 真实有效期 36 个月
• 反复冻融 5 次，Tm 下降 0.8 °C，对应单体损失 0.9 %，低于行业 1 % 红线

→ 若运输途中超温 25 °C 持续 72 h，补做加速实验，合格方可放行

亲和力常数：FcγR 家族对照表

• FcγRIa：KD 8 nM，1:1 结合，可用于 SPR 阳性对照
• FcγRIIa-H131：KD 1.2 μM，R131 变异体 3.4 μM，基因型不同信号差 3 倍
• FcγRIIIa-V158：KD 3.7 μM，F158 变异体 12 μM，直接决定 ADCC 窗口

→ 写实验方案时，把受体基因型写进材料栏，避免细胞系差异导致数据无法复现

内控参比：建立实验室“金批”

• 选三批 EU GMP 级 IgG2，混池后分装 200 μg/管，-80 °C 保存
• 每季度取一支跑 SEC-HPLC，峰面积 RSD ≤ 1 % 视为系统稳定
• 新到货批次先与金批做差值图谱，Δ 面积 ≤ 0.5 % 方可入库

→ 金批用完前 6 个月启动新一轮混池，保持量值溯源链不断

单位换算：mg、IU、OD280 三表速查

• 1 mg IgG2 = 1.35 IU WHO 国际标准 15/174
• A280 1.38 对应 1 mg/mL，光程 1 cm，比 IgG1 稍低 2 %
• 摩尔消光系数 210 000 M^-1cm^-1，做 FortéBio 定量时直接代入 1:1 模型

→ 写 SOP 把换算常数写死，避免实验员每次手算带来 3 % 误差