流式、WB、IHC、功能实验对 Fas 的要求各不相同。选错抗体,轻则信号弱,重则批次报废。下面按真实采购流程拆解关键决策点,直接给出可复制的参数表和砍价话术。
流式检测选 DX2,识别胞外区 118-136 aa,人鼠交叉,IgG1 亚型,Fc 段与二抗匹配广。EOS9.1 做阻断实验更狠,亲和力 6×10?? M,能把 FasL 竞争下去,适合细胞凋亡诱导模型。ZB4 是封闭型抗体,流式染色前加 5 μg/mL,可把自杀信号压到背景,验证信号特异性。下单前看说明书里“Applications”一栏,没有明确写“functional assay”直接跳过,省得买回来又投诉批次差异。
Fas 在活细胞表面拷贝数 2×103–2×10?,FITC 通道常被自身荧光淹没。改用 PE,亮度提升 5 倍,10? 拷贝细胞能把 Stain Index 拉到 12。做多色 panel 时,把 Fas 放到 APC,补偿矩阵更干净,CD8-APC-Cy7 与 Fas-APC 溢漏仅 1.8%,无需反复调补偿。采购清单里直接写“APC-anti-human Fas (DX2),0.2 mg/mL,50 tests”,供应商一看规格就知道是懂行的,报价水分至少砍 10%。
功能实验必须无叠氮,NaN? 会抑制线粒体呼吸,凋亡率直接掉 15%。流式纯检测可以选含叠氮版本,4 °C 保存两年不降信号,单支能省 120 元。IHC 抗体更要看是否含 BSA,含 BSA 的 1 mg/mL 抗体做封闭时背景更低,但不能用于 BCA 定量,提前规划实验路径,免得二次采购。
供应商拿不出这三组数据,直接换品牌,别让论文审稿人卡你重复性。
流式常规 Panel 每月 200 个样本,买 100 tests 用半年,开盖 20 次效价就开始飘。改买 500 tests,分装 50 μL/管,–80 °C 冻存,抗体回收率维持 95%,单 test 成本从 18 元降到 11 元。写采购申请时把“年用量 800 tests”写进理由,财务更愿意批大包装。
国产新锐品牌 A 把 DX2 杂交瘤买回去自建细胞库,流式阳性率 89%,比进口 B 品牌低 3%,但背景也低 2%,信噪比打平。做 WB 时,国产抗体在 48 kDa 处出现轻微杂带,进口抗体条带单一。论文投稿要求 WB 数据,直接选进口;只做流式筛查,国产就能交差。砍价话术:“国产性能已验证,预算压缩 30%,请给最优惠买三送一。”七成供应商会答应。
进口大厂能提供 24 株细胞系的 Fas 表达验证报告,附流式图、WB 图、IHC 图,直接放进补充材料,节省外包验证费 3000 元。国产厂商通常只给三株细胞数据,需要自己做验证。把“免费验证 10 株细胞”写进合同,对方实验成本 800 元,愿意换你长期订单。
抗体反复冻融活性掉 20%。合同里写明“干冰重量≥2 kg,运输时间≤72 h”,到货立即测流式阳性率,低于 90% 就退换。把条款拍照发给销售,90% 供应商会主动加冰,避免后续扯皮。