1. 捕获抗体克隆：克隆 67-4H11 对 pro-TIMP2 交叉 0%，批间 CV<4%

市售“泛-TIMP2”抗体实际识别前体区，血清 pro-TIMP2 占比 12%，结果假性抬高。选 67-4H11 只认成熟区 25 kDa，交叉率 0%，标准曲线斜率 0.92 AU/(pg/ml)。每换新批号，用 100 ng/ml pro-TIMP2 做掺入实验，回收率 98–103%，才签字收货。

2. 检测限 0.8 pg/ml 靠高亲和兔单抗，不是多克隆

多克隆检测限 5 pg/ml，低值样本成“零”被筛掉。兔单克隆 TP2-Rb-2D4，KD 2.3×10?11 M，背景降到 0.8 pg/ml，可区分健康人 3–5 pg/ml 与早期肾损伤 8 pg/ml。把检测限写进 COA，审稿人不再要求补质谱验证。

3. 基质稀释线性：1:4 稀释回收率 95%，再往下 MMP-2 干扰抬头

血清含 MMP-2 190 ng/ml，与 TIMP2 1:1 结合。稀释 1:2 回收率 88%，1:4 升到 95%，1:8 因蛋白浓度太低 TIMP2 吸附损失，回收掉回 85%。固定 1:4 稀释，误差最小，也省样本量，一滴指血 50 μl 足够 duplicates。

4. 标准品基质：用 5% BSA 替代 10% FBS，避免脂血浑浊

脂血样本 OD 650 nm 0.3，FBS 基标曲线被抬高 8%。换 5% BSA + 0.05% Tween-20，脂血 OD 降到 0.05，曲线线性 R2>0.998。BSA 批次差异小，价格只有 FBS 1/5，长期开单更省。

5. 显色时间：TMB 8 min 停在 0.6 AU，线性区最宽

TIMP2 浓度 1000 pg/ml 时 TMB 8 min 达 0.6 AU，继续孵育 12 min 进入平台，斜率下降 60%。每板放 0、250、500、1000 pg/ml 四点，8 min 统一终止，CV 压到 3%。把计时器连排枪动作写进 SOP，新手也能一次做对。

6. 酶标仪波长：450 nm 主读 + 620 nm 参比，扣脂血背景

脂血样本 450 nm 读数偏高 0.05 AU，用 620 nm 参比校正，ΔOD 落到理论曲线，误差 2%。双波长模式打开只需 3 秒，数据直接干净，省去离心去脂步骤，30 个样本节省 1 小时。

7. 质控品区间：低值 6 pg/ml，高值 600 pg/ml，覆盖 1–1000 pg/ml 曲线

自制混合血清添加重组 TIMP2，6 pg/ml 接近检测下限，600 pg/ml 接近上限，每板各两孔。低值 CV<8%，高值 CV<5%，曲线才放行。把质控图贴在实验记录，审计员直接签字，不用补三个月追溯。