抗体对溯源：克隆号 6H9 为何把 7 截短型漏掉

人源 CCL5 有 3 个天然截短型，缺失 2–7 位氨基酸。ELISA 捕获抗体若用克隆 6H9，表位落在 4–9 位，对 Δ2–7 截短型亲和力下降 90 %，结果把炎症样本低估 40 %。下单前看说明书“Recognition”一栏，写“full-length only”直接放弃。选 2D8 或 5D3，表位位于 30–35 位，全长与截短型通吃，血清回收率 95–105 %。

标准品基质：冻干品 vs. 液体预稀释的 2.7 倍价差

液体预稀释标准品开瓶即弃，10 瓶用完整盒报废，单样成本 48 元。冻干标准品可复溶 5 次，只要回收率偏差 <10 % 就继续用，单样成本 18 元。技术单页没写复溶稳定性就邮件问厂家，答复“仅限一次”一律按液体品计价，别被“方便”两个字多收 2.7 倍预算。

检测下线：化学发光法 0.3 pg/mL 是真是假

化学发光试剂盒标称灵敏度 0.3 pg/mL，背景是 2 h 封闭 + 30 min 底物。现实操作 96 孔板做不到 2 h 封闭，实验室常规 45 min，背景抬 3 倍，检测下限实际 1.2 pg/mL。做脑脊液样本，浓度区间 0.5–2 pg/mL，信号落在灰色地带。直接加 0.5 % BSA 延长封闭到 2 h，可把背景压回 0.06 RLUs，检测下限恢复到 0.4 pg/mL，额外时间成本 75 min，比重买高敏试剂盒便宜 600 元。

板底材质：高吸附链霉亲和素板把 CV 降到 4 %

CCL5 带正电，易与聚苯乙烯疏水位点非特异结合，常规板 CV 12 %。换链霉亲和素预包被板，利用生物素-链霉亲和素定向捕获，把变异系数降到 4 %，背景吸光度 0.04 降到 0.015。板价贵 8 元/块，省掉后续重复实验，96 孔整体成本反而降 15 %。

样本稀释液：EDTA 血浆需加 0.5 M NaCl 解聚

EDTA 螯合 Ca2?后 CCL5 形成 7 kDa 二聚体，标准品是单体，EC50 右移 2 倍。稀释液里加 0.5 M NaCl，破坏离子对，二聚体解离，剂量曲线与标准品重合，回收率 98 %。盐浓度高不影响抗体结合，ELISA 读数窗口保持 2.4 倍。把配方写进 SOP，审评员现场提问可直接翻出记录。

售后隐藏：免费数据处理模板值 2 000 元

CCL5 标曲常用 4PL，手工算 96 孔需 30 min。厂家提供 Excel 宏+GraphPad Prism 脚本，能把 4PL、回收率、CV 一次生成，省外包 2 000 元。下单前向销售要模板，5 min 内发邮箱说明技术支持在线；超过 1 h 无回应，后续出问题找不到人，直接换品牌。

现场验收：37 °C 加速 24 h 看标准品漂移

夏天运输箱内温度常飙到 40 °C。收货当天做加速测试：标准品 37 °C 放 24 h，再与 4 °C 对照同步测，偏差 >10 % 直接退货。拍照留证，电商平台可 0 成本退货，实验室零损失。