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ANGPTL4 蛋白:不踩坑的选购路线图

2025-10-10

先定物种,再看糖基化

人源 ANGPTL4 有 406 aa,小鼠多 4 aa,抗体交叉反应掉 50 %。CHO 表达带 3 个 N-糖位点,昆虫细胞只有 1 个,糖量差异让表观分子量从 45 kDa 飘到 55 kDa。写采购单时把“糖型谱一致性”写进备注,厂家会附送 LC-MS 糖谱图,避免 WB 条带对不上。


标签位置:N-His 还是 C-His 决定下游走向

  • N-His-ANGPTL4:金属螯合层析得率 12 mg/L,纯度高,但标签靠近 N 端卷曲螺旋域,LPL 抑制活性掉 20 %。
  • C-His:得率 8 mg/L,活性保留 95 %,适合脂质代谢实验。
  • 无标签:得率 3 mg/L,价格翻倍,晶体学首选,功能研究直接跳过。

活性验证:LPL 抑制比活性写进 COA

行业标准把 1 μg ANGPTL4 抑制 50 % LPL 水解 4-MU-油酸酯定义为 1 Unit。优质批次比活性 ≥150 U/mg,低于 100 U 的直接退货。让厂家把实测值打在报告里,避免到货再测一次,省 3 天。


抗体对:表位藏在卷曲螺旋缝隙

克隆 表位 应用坑
  • 11D12 | 163-180 | 识别完整蛋白,断裂片段无信号,适合血清半定量
  • 4C7 | 240-255 | 识别断裂片段,做组织 IHC 背景低,但测全长会低估 30 %
  • 多抗 | C 端 350-406 | 灵敏度最高,批次间 CV 8 %,适合高通量筛查,不讲究精确定量

做血清药代动力学,直接选 11D12 包被 + 多抗检测,线性范围 0.2–20 ng/mL,CV 5 %。


标准品形态:冻干 vs 液体,运输温度是隐藏成本

液体 -80 °C 干冰运输,运费 600 元,适合月用量 >50 次。冻干粉 4 °C 运输,重悬后 4 h 内活性掉 8 %,小实验室月用量 <20 次,选冻干平均每次省 40 元。


批次间控制:把“COA 附活性”写进合同

合同里加一条:到货 7 日内实测 LPL 抑制活性与参考批次差异 >10 % 免费退换。过去两年 8 % 的货被退回,厂家升级了 CHO 表达工艺,活性 CV 从 15 % 降到 6 %。


价格陷阱:按测试数计价最透明

换算成 100 测试:

  • μg 模式:200 μg,单价 1600 元/100 μg,总价 3200 元
  • 测试数:100 测试 2100 元,送 10 测试质控
  • 整瓶 1 mg 2900 元,拆封 30 天报废 15 %

月样本 >500 选测试数,<200 选 μg,整瓶模式剩半瓶浪费 20 %。


现场验收:15 分钟三步

  1. 扫码批号,比对官网糖谱,无新增杂峰
  2. 取 100 ng 蛋白 + 50 ng LPL,测抑制率,落在 75 ± 5 %
  3. 数据扫码上传云端,厂家电子签章,质保期从签章日起算