它不止帮 IGF-1 看门，还能亲自下场激活 p38 通路，把细胞滞留在 G1 期

结构速写：三个域，一张名片

N 端 IGF 结合域锁定 IGF-1/2，降低游离浓度；中央可变区提供肝素结合位点，锚定细胞外基质；C 端低同源区是 IGFBP-7 独有模块，直接对接 TMEM98，启动不依赖 IGF 的旁路信号。突变 C 端 W194A，IGF 依旧被绑，抗增殖活性全失，说明信号职能与 IGF 无关。

IGF 依赖模式：先把游离 IGF-1 降到 30%，再让 IGFR 安静

IGFBP-7 与 IGF-1 亲和力 0.2 nM，比 IGFR 高 5 倍。生理浓度 100 ng/mL 时，能把 50 ng/mL 游离 IGF-1 压到 15 ng/mL，IGFR 磷酸化水平下降 60%，PI3K-AKT 轴被踩住，细胞停在 G1 早期。做细胞周期实验时，外加 200 ng/mL IGF-1 可逆转阻滞，验证阻断是否依赖 IGF。

IGF 独立模式：IGFBP-7-TMEM98-p38 的三级接力

IGFBP-7 结合 TMEM98 的胞外段，解离常数 45 nM，触发受体聚集，招募 TRAF6，激活 p38 MAPK。磷酸化 p38 入核后上调 p21CIP1，cyclin E-CDK2 活性被抑制，细胞照样停在 G1。用 p38 抑制剂 SB203580 预处理，IGFBP-7 的抗增殖作用消失 90%，证明这条旁路真实存在。

细胞外基质锚定：肝素链让局部浓度升高 10 倍

中央域富含 KRK 基序，与 heparan sulfate 亲和力 0.8 μM。加入肝素酶 III 消化基质，IGFBP-7 在细胞表面浓度从 800 ng/mL 掉到 80 ng/mL，p38 激活水平回到基线。做 3D 培养时，提前用肝素酶处理胶体，可验证锚定是否关键。

分泌动力学：TGF-β1 先升 2 倍，IGFBP-7 再跟 4 倍

原代成纤维细胞被 TGF-β1 刺激 6 h，IGFBP-7 mRNA 升高 4 倍，蛋白在 24 h 达到峰值。CRISPR 敲除 Smad3，诱导效应消失 80%，说明分泌受 Smad 经典通路驱动。做条件培养基收集时，提前 24 h 加 5 ng/mL TGF-β1，可把 IGFBP-7 浓度推到 600 ng/mL，省掉外加蛋白成本。

受体下调反馈：持续刺激 48 h，TMEM98 内化 70%

长时间 500 ng/mL IGFBP-7 处理，TMEM98 通过 clathrin 途径内化，膜表面受体只剩 30%，细胞重新进入周期。设计实验时，刺激 24 h 后必须换液，避免受体脱敏掩盖早期阻滞效果。

检测技巧：磷酸化 p38 比总蛋白更灵敏

Western 测 p38 磷酸化，5 ng/mL IGFBP-7 就有条带，总 p38 无变化。用 Phos-tag 胶可把磷酸化条带分开，定量范围 0.5–50 ng/mL，比 ELISA 省样本 90%。