把活性、纯度、内毒素、批间差全部量化，实验失败再也不用甩锅给“细胞状态”

定量活性：ED50 20–50 ng/mL 的 SH-SY5Y 存活模型

行业标准用 RET 依赖的 SH-SY5Y 细胞，无血清起始密度 1×10?/100 μL，48 h 后 CCK-8 读值。ED50 落在 20–50 ng/mL 为合格，曲线四参数拟合 R2≥0.995。斜率<0.85 提示蛋白有聚集体，RET 二聚化受阻，活性虚高。收货先跑一遍 8 点梯度，ED50 跑出 70 ng/mL 直接退货。

纯度双证：SDS-PAGE ≥97% + SEC-MALS 聚体 ≤3%

SDS-PAGE 单一条带只是门票，SEC-MALS 才能说明有没有二聚体。聚体>3% 时，RET 信号被稀释，原代中脑神经元 7 天存活率掉到 80%。申报 IND 时，MALS 原始图谱必须附在模块 3，缺图就发补。实验前自己再跑一遍 Superdex 200，5 分钟决定用还是扔。

内毒素 0.05 EU/mg：多巴胺神经元比巨噬细胞更敏感

原代多巴胺神经元对 LPS 阈值 0.01 EU/mL，GDNF 工作浓度 10 ng/mL，换算后内毒素≤0.05 EU/mg 才能把背景凋亡压到 5% 以下。高于 0.1 EU/mg，TH+ 细胞 72 h 存活率掉 15%，电生理记录自发放电频率乱套。索要 LAL 实测值，报告写“<0.05 EU/mg”却给不出数字，按 0.049 EU/mg 算体积，再评估极限用量。

糖基化位点：CHO N-链接 2 位点 vs E.coli 无糖基

CHO 版本在天冬酰胺 126、226 位带 N-糖，体内半衰期 4.2 h，动物实验更友好。E.coli 无糖基，晶体学结构解析不含柔性糖链，分辨率能到 1.8 ?。细胞实验选 CHO，做 X-ray 选 E.coli，别让糖链差异成为数据噪点。下单前在备注栏写明“CHO 糖基化”或“E.coli 无糖基”，合同、COA、瓶子标签三处必须一致，防止混发。

批间差 ≤5%：RET 磷酸化比值说了算

批次差异主要来自蛋白折叠中间体。厂家用 20 L 灌流发酵，溶氧>40%，把不完全折叠体压到 2%。用户验收时抽三批，统一用 30 ng/mL 刺激 SH-SY5Y，RET-Y1062 磷酸化比值批间 CV≤5%。>6% 的批次直接退货，避免免疫印迹条带灰度来回跑。

稳定性窗口：?70 ℃ 24 个月 vs 37 ℃ 7 天

蛋白在 ?70 ℃ 24 个月活性无漂移，37 ℃ 7 天加速损失 8%。夏季运输车厢 45 ℃ 持续 6 h，活性掉到 92%，对应 3 天失效风险<2%。收货先扫二维码查加速报告，缺失 37 ℃ 数据的批次直接拍照留证，售后索赔有凭据。

分装冻融：5 次循环后活性 93%±2%

GDNF 对冰晶敏感，第 6 次冻融活性掉到 85%。厂家加 8% 海藻糖 + 0.02% Tween-80，能把 5 次循环损失压到 7%。实验室收到 500 μg 大包装，按 20 μL/管分装，液氮气相保存，一次取用避免反复，实测活性与标称值偏差<5%。

平台迁移系数：ELISA→MSD→AlphaLISA

MSD 电化学发光灵敏度比 ELISA 高 5 倍，同一样本读值×0.20 对齐 ELISA 标尺。AlphaLISA 受血清基质干扰小，读值×0.18。做多平台对比时，先把浓度归一到 ELISA 当量，再画柱状图，审稿人不会质疑量纲不一致。