1. 靶标特性：不只是“脂肪素”

• 分子架构：244 aa，C 端球状结构 + 胶原三股螺旋，血清内形成三聚、六聚、HMW 多聚
• 功能差异：HMW 比例决定胰岛素敏感性，单纯测总量易掩盖代谢风险
• 稳定区间：pH 7.4 时 4 °C 可存 48 h，酸性或反复冻融让 HMW 解聚，读数虚高

2. 检测形式：总量 vs 高聚体

价格比例*：以国产总量试剂盒为基准

代谢研究推荐两步走：先总量初筛，再 HMW 验证，避免单数据点误判

3. 抗体对决定批间差

• 捕获克隆：A40-110，小鼠 IgG1，识别 90-110 aa，胶原区保守，批间斜率差 <5 %
• 检测克隆：A60-225，兔单抗，识别 160-182 aa，避开糖基化位点，血清基质干扰低
• 验证动作：加入 2 μg/mL 重组三聚体，回收率 92-105 %；六聚体无信号丢失

4. 样本类型与预处理

• 血清：凝固 30 min 后 3000 g 离心 10 min，溶血指数 < 2，结果不受影响
• EDTA 血浆：总量比血清低 8 %，HMW 比例一致，可用同一标准曲线
• 细胞上清：3T3-L1 分化 12 d 后浓度 0.5-2 μg/mL，需浓缩 10 倍再测 HMW

5. 校准品溯源与赋值

• 标准来源：NIBSC 21/142，浓度 10 μg/ampoule，赋值误差 ±3 %
• 赋值方式：采用 6 点 4-PL 拟合，每批板间 r ≥ 0.998，低值 0.2 μg/mL 回算偏差 ≤ 8 %
• 质控血浆：低 3.2 μg/mL，高 15 μg/mL，2-8 °C 保存 30 天，CV ≤ 6 %

6. 品牌实测横评

Mercodia 采用一步法，适合门诊高通量；R&D 灵敏度 0.04 μg/mL，发 SCI 更稳

7. 运输与储存避坑

• 运输温度：蓝冰 2-8 °C，?20 °C 运输易致抗体聚集，背景升高 20 %
• 冻干标准品：水分 ≤ 3 %，复溶后分装 50 μL/管，?80 °C 冻存 6 个月活性无降
• 底物稳定性：TMB 开封 4 周用完，避光保存，发黄即弃

8. 售后与数据支持

• 免费重测：标准曲线 r < 0.99 包退换，厂家承担运费
• 计算模板：Excel 4-PL 自动模板 + GraphPad 宏，5 min 出图
• 批次预留：一次锁定 3 批，保证纵向研究数据一致，发文章不再补实验