蛋白种属：人源还是鼠源，决定交叉实验能否一次过

人 TIM-1 胞外区 307 aa，鼠 305 aa，同源性 58 %。做人源肾损伤模型，用鼠蛋白测血清，回收率 72 %，背景高 0.08 OD。选蛋白先看实验终点：做人源样本必须买人源蛋白，做动物模型再配同源蛋白，避免“人鼠混用”被审稿人质疑。

标签位置：His 在 N 端还是 C 端，影响流式检测信号

N-6×His 占据金属蛋白酶结构域边缘，抗体 1D12 识别表位被遮挡，流式 median fluorescence 下降 40 %。C-6×His 远离活性区，信号恢复 95 %。计划做流式封闭实验，直接选 C 端标签，省得二次换蛋白浪费预算。

表达体系：CHO 糖基化 vs 293 唾液酸，半衰期差 6 h

CHO 源 TIM-1 分子量 85–90 kDa，含复杂型 N-糖，小鼠体内半衰期 14 h；HEK293 源 80 kDa，唾液酸含量高，半衰期 20 h。做体内阻断实验，选 HEK293 源，剂量可降 30 %；体外酶活实验两种体系 ED?? 无差异，选价格低的 CHO 源即可。

内毒素水平：0.5 EU mg?1 是细胞实验红线

TIM-1 本身活化 NF-κB，内毒素 1 EU mg?1 让 THP-1 细胞 TNF-α 本底升高 3 倍。厂家 COA 写 ＜1 EU mg?1 不够，合同里刻 0.5 EU mg?1，到货 LAL 复测，超标就退货，批次稳定性直接锁死。

冻干 vs 液体：海藻糖 4 % 让 25 °C 加速 4 周活性掉＜5 %

液体蛋白 4 °C 存 3 个月，冻干品 25 °C 加速 4 周，CHO 源 TIM-1 活性掉 18 %；加 4 % 海藻糖冻干，活性掉 4 %。发文章做长期稳定性，直接选含海藻糖冻干款，运费也省 50 %。

抗体对：克隆 222414 与 222410 配对，ED?? 0.8 ng mL?1

R&D 体系捕获 clone 222414 识别人 TIM-1 的 IgV 域，检测 clone 222410 识别黏蛋白域，配对后 ED?? 0.8 ng mL?1，背景 0.03 OD。换用其他克隆，ED?? 升到 3 ng mL?1，灵敏度直接掉两档。写采购单时把克隆号写进行号，避免仓库发错货。

价格算法：把“元/μg”换成“元/实验”才真实

A 品牌 100 μg 2800 元，B 品牌 50 μg 1500 元，看似 A 便宜 7 %。A 的 ED?? 3 ng mL?1，每孔用 100 ng；B 的 ED?? 0.8 ng mL?1，每孔用 30 ng。换算到 96 孔板，A 可做 1000 孔，B 可做 1666 孔，B 的实际成本便宜 40 %。把“元/实验”算清，再贵的品牌也可能更划算。