分子骨架：73 aa 与 3 个二硫键的容错率

CXCL1 单链 73 aa，Cys9-Cys34、Cys11-Cys51、Cys23-Cys56 构成三桥核心。错配一条桥，EC50 从 12 ng/mL 飘到 28 ng/mL。采购把“氧化折叠验证：还原 SDS 单一条带，质谱分子量 7 889 ±2 Da”写进 COA，可把隐性失活体挡在门外。

比活性定义：WHO 90/466 与商用货的换算

WHO 90/466 用中性粒细胞趋化法标定：1 000 IU ≈ 10 ng。厂商写“≥1×10? IU/mg”，却用 CXCR2-转染 BaF3 测活，同一支 90/466 给出 1.2×10? IU/mg 与 2.1×10? IU/mg 两种结果，差 75 %。下单前让厂家提供“neutrophil chemotaxis”原始记录，把 IU 与 ng 对应关系写进批次文件，才能横向比对。

表达系统：E.coli 包涵体比活性落后 30 %

E.coli 包涵体复性后二硫键错配率 10 %，EC50 从 12 ng/mL 漂到 16 ng/mL。HEK293 分泌版本错配 <1 %，比活性 1.5×10? IU/mg，比 E.coli 高 30 %。价格只差 15 %，做原代中性粒细胞实验优先选 HEK293 源，数据更紧。

内毒素门槛：0.01 EU/mg 是中性粒细胞实验硬杠

CXCL1 本身不激活 TLR4，LPS 0.05 EU/mg 即可让中性粒细胞 CD11b 上调 25 %，趋化指数虚高。采购把“LPS <0.01 EU/mg”写进合同，并要求提供动态浊度法原始曲线，线性 R2 ≥0.98，才能过 FDA 细胞治疗指南。

保护剂配方：海藻糖 3 % 冻干，活性保留 95 %

3 % 海藻糖冻干品 37 °C 加速 4 周，趋化活性保持 95 %；甘露醇配方仅 83 %。海藻糖玻璃态 Tg 高 12 °C，能锁住 CXCL1 的 Cys23-Cys56 二硫键。货号带“trehalose-based”字样，收货后 4 °C 可存 24 个月，无须 ?80 °C 占空间。

标签纯度陷阱：HPLC 98 % 不够，需加质谱

CXCL1 理论 pI 9.3，阳离子交换 HPLC 主峰后常拖一个 6 % 小峰，是 Met6 氧化形式，EC50 高 2 倍。采购协议写“主峰后拖尾 <2 %，且氧化形式 MS 未检出”，让厂家附 MALDI 图，可把隐性失活体挡在门外。

分子量校验：73 aa 还原 8.1 kDa 是及格线

MALDI 测得 8 189 Da 说明 N 端甲硫氨酸未切除，体外活性低 20 %。合格还原质量 8 058 ±2 Da，要求供应商把质谱原始 raw 文件发邮件，收货即可比对，省得自己再跑一次。

储存浓度：0.5 mg/mL 是聚集拐点

动态光散射显示 0.5 mg/mL 以上 CXCL1 在 4 °C 24 h 出现 90 nm 寡聚峰，EC50 漂移 1.5 倍。工作液先用 10 mM 柠檬酸 pH 4.0 稀释到 0.1 mg/mL，再用 PBS-0.05 % CHAPS 稀释至实验浓度，24 h 内活性 CV <5 %。

生物读数线性窗：5–150 ng/mL 趋化指数 0.9–0.2

Neutrophil ChemoTx 实验里，5 ng/mL 趋化指数 0.9，150 ng/mL 降到 0.2，R2 = 0.99。试剂盒写“线性 1–200 ng/mL”是把高浓度平台强拉直线，1 ng/mL 信噪比 1.2，误差 30 %。设计剂量落在 5–150 ng/mL，可落在真实可用区间。

批间 CV：96 孔 ChemoTx 平台 <10 %

96 孔 ChemoTx 系统，三批次 CXCL1 在 30 ng/mL 趋化中性粒细胞，批间 CV 8 % 直接合格。把“ChemoTx CV ≤10 %”写进技术协议，厂家会把复性缓冲液导电率卡在 4.0 ±0.1 mS/cm，省得自己反复验证。

文件链：IND 申报三件套

1. 质谱还原质量原始图
2. 内毒素动态浊度法标准曲线
3. 体外趋化与 WHO 90/466 的桥接报告

电子版本盖章，随货同行，FDA 审评一次通过。